[發明專利]新城疫、鴨大舌病二聯卵黃抗體的制備方法

在審

• 申請號: 202010000056.2
• 申請日: 2020-01-01
• 公開（公告）號: CN111087466A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 安同偉;高彬;馮海波
• 申請（專利權）人: 天津赫萊恩特生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種新城疫及鴨大舌的二聯卵黃抗體的制備方法的制備方法，該技術方案以新城疫、鴨大舌病病毒作為免疫原接種蛋雞，設計了科學合理的免疫接種方法和接種劑量，使得各抗體均達到了較高的效價水平。在此基礎上，本發明以不同抗體的特定效價指標為條件確定了卵黃抗體的提取時機，有效保證了所得卵黃抗體的治療效果。與此同時，本發明進一步設計了針對性的卵黃抗體提取工藝，所得的卵黃抗體不僅具有較高的效價，同時對新城疫、鴨大舌病具有確切的預防和治療效果，該方法的建立填補了卵黃抗體領域對鴨大舌病治療的技術空白，同時實現了上述兩種疾病的同時防治，極具推廣前景。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品技術領域，具體涉及新城疫、鴨大舌病二聯卵黃抗體及其制備方法。

背景技術

新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。以高熱、呼吸困難、下痢、神經紊亂、黏膜和漿膜出血為特征。具有很高的發病率和病死率，是危害養禽業的一種主要傳染病。OIE將其列為A類疫病。

鴨大舌病主要發生在兩個日齡段。一是發生肉鴨3～13日齡和21～28日齡，患鴨多表現為上下喙變短，鴨舌彎曲突出外翻，舌頭外耷，僵硬而不靈活，嚴重者影響采食，而且患鴨嘴發生器質性病變后很難恢復，故雖然本病死亡率不高，但感染鴨群料肉比顯著升高，出欄合格率下降，給養殖戶造成了巨大的經濟損失。

兩種水禽病目前主要采用化藥和疫苗預防，但化藥藥殘、抗藥性和疫苗免疫的空窗期影響了養殖戶在新城疫和鴨大舌病的防治意識的提高。卵黃抗體具有性質穩定、特異性強、制備成本低、口服安全等優點，產品的開發具有良好的經濟效益和社會效益，在診斷、預防和治療人類和動物各種疾病中具有良好的應用價值。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新城疫與鴨大舌病二聯卵黃抗體的制備方法，該方法安全穩定，成本經濟，使用方便，無生物毒性，有利于環境衛生及食品安全。

為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

一、免疫原抗原的制備

1、病毒的增殖：將新城疫病毒毒株和鴨大舌病病毒毒株分別用滅菌生理鹽水稀釋至200ELD₅₀/0.1ml，經尿囊腔分別接種10-11日齡易感鴨胚，每胚0.1-0.2ml，置37℃孵育24小時，照胚棄去24小時內的死胚；對接種24小時后的鴨胚，每4小時照胚一次，將死亡胚放2-8℃冰箱；收集24-120小時死亡鴨胚的尿囊液及胚體，勻漿后，反復凍融2次，再以4200r/min離心20-30分鐘，收集上清液，分別定量分裝于無菌安培瓶中，注明收獲日期、毒種代次，冷凍保存備用；

2、接種：用滅菌生理鹽水將增殖所得兩種病毒毒種分別稀釋10³-10⁵倍，經尿囊腔接種10-11日齡易感鴨胚，每胚0.1-0.2ml，封孔后，置36-37℃繼續孵育120小時，不必翻蛋；

3、孵育：接種后24小時開始照胚，棄去24小時內的死胚，之后每4小時照胚一次，24-120小時死亡的鴨胚隨時取出，置于2-8℃冷卻12-24小時；

4、收獲：將冷卻的鴨胚取出，用碘酊消毒氣室部位，無菌收集典型病變鴨胚的尿囊液和胚胎，收集時逐個檢查胚胎病變，凡胚胎腐敗、胚液渾濁或胚胎無新城疫病毒或鴨大舌病所引起的特征性病變者，棄去不用；每個毒種的5-8枚鴨胚的尿囊液和胚胎混為1組，勻漿后反復凍融2次，再以4200r/min離心30分鐘，分別取兩種病毒上清液置于滅菌容器內，記為A即新城疫病毒液、B即鴨大舌病毒液，均置于-20℃保存備用。

5、病毒液滅活：將AB兩種病毒液分別加入10％的甲醛溶液，隨加隨搖使其充分混合，使甲醛溶液的終濃度為0.1％，37℃條件下滅活24小時，期間每4小時搖晃一次，滅活完畢，滅活后的病毒液置2～8℃保存，有效期為30日；

二、油乳佐劑免疫原的制備