[發明專利]子宮內膜干細胞的定向成軟骨分化培養

在審

• 申請號: 202010000033.1
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111057678A
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 王凱
• 申請（專利權）人: 南昌諾匯醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 南昌卓爾精誠專利代理事務所(普通合伙) 36133
• 代理人: 賀楠

本發明公開了一種子宮內膜干細胞的定向成軟骨分化培養方法，其特征在于：使用(2Z,5E)?7?羥基?3,7?二甲基?2,6?辛二烯?1?O?[α?L?鼠李糖基(1→6)]?β?D?葡萄糖苷進行誘導培養，本發明人發現，(2Z,5E)?7?羥基?3,7?二甲基?2,6?辛二烯?1?O?[α?L?鼠李糖基(1→6)]?β?D?葡萄糖苷可以用于高效誘導子宮內膜干細胞成軟骨分化誘導得到軟骨細胞，誘導8天即可分化為軟骨細胞。

技術領域

本發明涉及一種子宮內膜干細胞的定向分化培養，屬于干細胞培養技術領域。

背景技術

人子宮內膜是一個高度再生的組織，女性一生大約要經歷子宮內膜400 多個周期的脫落和再生。研究發現，子宮內膜這種巨大的再生能力被認為與人類子宮內膜干細胞有直接關系，受到越來越多學者的關注。目前，子宮內膜干細胞分類較為多樣化，包括子宮內膜細胞側群( side population，SP) 、子宮內膜間充質干細胞、月經血來源的干細胞等，其中子宮內膜間充質干細胞因其數量較多，生物學特性明顯人類子宮內膜是一種高度動態的組織，周期性地經歷增殖期、分泌期、月經期，

具有顯著的再生能力，能從月經后最初的 0.5- 1 毫米長到 5- 7 毫米。據文獻報道，來源于子宮內膜組織的間充質干細胞不僅存在于基底層，經血中也存在。子宮內膜組織可全子宮切除術后標本、診刮組織等中獲取，即使絕經后期女性也可在無禁忌情況下應用雌激素刺激內膜生長來獲取。hEMSCs 因其顯著的增殖能力、容易獲取，成為構建組織工程韌帶具有吸引力的、新的細胞來源。等受到更多關注。

本發明旨在提供一種子宮內膜干細胞的定向分化培養成軟骨細胞的方法，在軟骨組織修復工程上可能具有很大的應用潛力。

發明內容

本發明的目的是提供一種子宮內膜干細胞的高效定向分化培養成軟骨細胞的方法，在組織修復工程上可能具有很大的應用潛力。

豨薟為菊科（Asteraceae）豨薟屬Siegesbeckia L.一年生草本植物，別名風濕草，肥豬草、黃花草、珠草等，為常用中藥，始載于唐代《新修本草》。近期有人從中分離得到一個新化合物：(2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷，其結構式如下：

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本發明人發現，(2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷可以用于高效誘導子宮內膜干細胞成軟骨分化誘導得到軟骨細胞，誘導8天即可分化為軟骨細胞。

本發明用到的成軟骨誘導液配方：DMEM 低糖培養基+10%FBS+10-20μg/m L (2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷+50μg/mL 抗壞血酸。

本發明所需要解決的技術問題可以通過以下技術方案來實現。

一種子宮內膜干細胞的高效定向分化培養成軟骨細胞的方法，其包括：

使用(2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷進行誘導培養，(2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷結構如下：

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作為優選，本發明用到的成軟骨誘導液配方：DMEM 低糖培養基+10%FBS+10-20μg/m L (2Z,5E)-7-羥基-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-O-[α-L-鼠李糖基(1→6)]-β-D-葡萄糖苷+50μg/m L 抗壞血酸。

具體步驟如下：

hEMSCs 的原代培養：