[發明專利]制備普卡那肽的改進方法

在審

• 申請號: 201980090725.5
• 申請日: 2019-04-01
• 公開（公告）號: CN113412272A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: S·阿達克;M·邦特;C·庫爾卡尼;V·斯瓦米;N·喬格丹德;H·加吉爾
• 申請（專利權）人: 恩澤生物科學有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/14
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 李棟修;褚瑤楊

1.一種制備普卡那肽的方法，其包括以下步驟：

(a)使用合適的試劑使式(I)的直鏈H₂N-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-OH單環化，以獲得式(VI)的單環肽，

(b)使用反相柱色譜純化步驟(a)中獲得的式(VI)的單環肽，

(c)使用合適的試劑使步驟(b)中獲得的式(VI)的單環肽雙環化，以獲得式(VII)的雙環肽

和

(d)使用反相柱色譜將步驟(c)中得到的式(VII)的雙環肽純化并脫鹽，以獲得純的普卡那肽。

2.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，步驟(a)中的式(I)的直鏈是通過包括以下步驟的方法獲得的：

(a)使用偶聯試劑將片段A與王樹脂結合的片段B偶聯以獲得王樹脂結合的受保護的肽片段；

(b)使用試劑三氟乙酸/三異丙基硅烷/DODT/水將步驟(a)中獲得的所述王樹脂結合的受保護的肽片段切割和脫保護，以獲得式(I)的直鏈，H₂N-Asn1-Asp2-Glu3-Cys4-Glu5-Leu6-Cys(Acm)7-Val8-Asn9-Val10-Ala11-Cys12-Thr13-Gly14-Cys(Acm)15-Leu16-OH。

3.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，用于純化單環肽的反相柱色譜具有：柱規格：250×80mm，介質規格：C-18，10μ，100A°，流動相A：0.02M三乙基磷酸銨的水溶液，pH 6.5，和流動相B：乙腈。

4.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，用于純化式(VII)的雙環肽的反相柱色譜具有：柱規格：250×80mm，介質規格：C-18，7μ～10μ，100A°，流動相A：0.02M三乙基磷酸銨的水溶液，pH 6.5，和流動相B：乙腈。

5.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，用于使式(VII)的雙環肽脫鹽的反相柱色譜具有：柱規格：250×80mm，介質規格：C-18，10μ，100A°，流動相A：0.025％氫氧化銨，流動相B：乙腈，流動相C：0.1M～0.2M乙酸銨的水溶液，和流動相D：0.1％三氟乙酸的水溶液。

6.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，用于純化式(VII)的雙環肽的反相柱色譜具有：柱規格：250×80mm，介質規格：C-18，10μ，100A°，流動相A：0.1％～0.2％三氟乙酸的水溶液，和流動相B：乙腈。

7.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，單環化步驟中的所述合適的試劑為1％～2％H₂O₂溶液。

8.如權利要求1所述的制備普卡那肽的方法，其中，雙環化步驟中的所述合適的試劑為2％碘溶液。

9.如權利要求2所述的制備普卡那肽的方法，其中，片段A為Fmoc-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-OH或Boc-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(Trt)-Glu(OtBu)-OH。

10.如權利要求2所述的制備普卡那肽的方法，其中，所述王樹脂結合的片段B為H₂N-Leu-Cys(Acm)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(Trt)-Thr(OtBu)-Gly-Cys(Acm)-Leu-O-王樹脂。

11.如權利要求2所述的制備普卡那肽的方法，其中，所述片段A的長度不超過5個氨基酸單元。