[發明專利]推定細胞數的方法以及推定細胞數的裝置

在審

• 申請號: 201980069346.8
• 申請日: 2019-09-05
• 公開（公告）號: CN112888792A
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 櫻井翼;平圭佑
• 申請（專利權）人: 普和希控股公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12M1/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 柯瑞京

本發明提供一種非侵入性地推定細胞數的方法以及裝置。使用簡便的方法例如分光法，推定培養某細胞的培養基包含的細胞代謝物的濃度。通過適用于預先得到的表示所述細胞代謝物的濃度與所述某細胞的細胞數的關系的關系信息，能夠推定所述某細胞的細胞數。在此，在分光法中，由于細胞代謝物的濃度越高，越能夠正確地推定細胞消耗物的實際的濃度，因此在細胞培養初期～中期中，推定伴隨著細胞的培養隨時間減少的細胞消耗物的濃度，在細胞培養中期～后期中，推定伴隨著細胞的培養隨時間增加的細胞產生物的濃度。由此，在從細胞培養初期到末期為止的全部的范圍內，能夠進行細胞數的推定。

技術領域

本發明涉及推定細胞數的方法以及推定細胞數的裝置。

背景技術

例如，作為癌癥、白血病的治療方法，已知有從患者的體內取出與患者的免疫相關的細胞，在患者的體外進行人工培養后，再次返回到患者的體內的方法。此時，存在想要以非侵入性方法且連續地推定培養中的細胞數這樣的制造中的要求。另外，在本說明書中，所謂“非侵入性方法”，是指不對作為對象的細胞進行采樣的方法。

已知有細胞代謝物的濃度和細胞數具有相關性。因此，作為推定培養中的細胞數的方法，考慮到如下的方法，即，推定伴隨著細胞的培養隨時間變化的培養基中的細胞代謝物的濃度，將所推定出的濃度與已有的數據庫進行對照(例如參照專利文獻1)。在數據庫存放有細胞代謝物的濃度與細胞數的關系信息。另外，在本說明書中，所謂“細胞代謝物”，意味著在細胞的代謝中使用的細胞消耗物以及細胞產生物。細胞消耗物是在細胞的代謝的過程中消耗的物質。因此，伴隨著細胞的培養隨時間減少。細胞消耗物例如是葡萄糖。細胞產生物是在細胞的代謝的過程中產生的物質。因此，伴隨著細胞的培養隨時間增加。細胞產生物例如是乳酸鹽(lactate)。

細胞代謝物的濃度與細胞數的關系信息成為推定細胞數的前提，因此，需要具有高精度。作為高精度地獲取細胞代謝物的濃度與細胞數的關系信息的方法，可舉出生物測定(bioassay)法。作為具體例，首先，提取培養細胞的培養基的一部分。向所提取的培養基加入僅與特定的細胞代謝物進行反應的試劑，檢測通過使試劑與培養基中的細胞代謝物進行反應而生成的反應物的發光信號。在此，關于發光信號，只要能夠進行檢測，則對于可見光、熒光、磷光等種類沒有限制。

在此，發光信號的強度與細胞代謝物的濃度處于比例關系。因此，通過檢測發光信號，能夠測定提取的培養基中的細胞代謝物的濃度。培養基中的細胞數能夠通過基于細胞計數板的使用等的公知的方法來測定。由此，能夠得到細胞代謝物的某濃度下的細胞數的信息。同樣地，通過得到細胞代謝物的各種各樣的濃度下的細胞數的信息，能夠獲取細胞代謝物的濃度與細胞數的關系信息。此外，作為試劑，也可以使用示出依賴于細胞代謝物的濃度的顯色的顯色試劑等。

然而，生物測定法是侵入性的方法，并且不能避免提取器具等與培養基接觸。因此，存在培養基的污染等問題。此外，在培養中難以多次進行采樣，因此只能斷續地得到細胞數的信息。

因此，與生物測定法不同地，考慮基于分光法的方法(approach)。具體地，對培養基照射對細胞不造成不良影響的波長的光線，測定其吸光度、散射度。通過對得到的測定值使用多變量解析等解析手段，能夠推定細胞代謝物的濃度。通過查詢這樣推定出的細胞代謝物的濃度與使用生物測定法獲取到的關系信息，能夠推定所推定出的細胞代謝物的濃度中的細胞數。分光法具有非侵入性且能夠連續地推定細胞代謝物的濃度的優點。

在先技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2014-45663號公報

發明內容

發明要解決的課題