[發明專利]里氏木霉的突變株和蛋白質的制造方法

在審

• 申請號: 201980066036.0
• 申請日: 2019-10-10
• 公開（公告）號: CN112805366A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 加川雄介;平松紳吾;山田勝成
• 申請（專利權）人: 東麗株式會社
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/31;C12P21/02
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 曾禎;段承恩

本發明涉及具有包含序列號8所示的氨基酸序列的多肽的功能缺損或降低的突變的里氏木霉的突變株，優選為進一步在選自包含序列號6、7、9、10的任一項所示的氨基酸序列的多肽中的1種以上多肽中具有下述所示的突變的突變株，使用該突變株，能夠在將培養液中的培養液的粘度保持得較低的同時，生產蛋白質、特別是纖維素酶。

技術領域

本發明涉及能夠將培養液的粘度保持得較低、蛋白質的制造能力提高的里氏木霉的突變株和使用該突變株的蛋白質的制造方法。

背景技術

已知里氏木霉具有高的蛋白質制造能力，一直以來進行了使用里氏木霉的蛋白質的制造的研究。里氏木霉以纖維素、乳糖、纖維二糖等作為誘導物質，在蛋白質之中特別是制造被分類為糖化酶的纖維素酶。為了強化纖維素酶制造量，自古以來對于以控制纖維素酶制造的因子的過表達、缺損為代表的基因的改變、培養條件的最適化等進行了大量研究。

另一方面，木霉屬菌屬于生長繁殖、蛋白質的制造需要氧的好氧性絲狀菌。另外，木霉屬菌具有如果在液體培養基中培養，則隨著增殖而培養液的粘度提高這樣的特征。如果培養液的粘度提高，則氧、營養素的分布變得不均勻，因此在培養木霉屬菌時，需要攪拌培養液、增加氧供應量來防止培養中的溶解氧飽和度的降低，將其維持在一定以上。另外，如果培養槽大型化，則氧體積傳遞系數降低，因此為了將培養中的溶解氧飽和度保持在一定以上，需要進一步增加攪拌數、氧供應量。然而，如果增加攪拌數，則存在付與菌體以大的剪切損傷這樣的課題，還存在為了增加氧供應量而需要大的能量這樣的課題。

專利文獻1～6中分別公開了通過使木霉屬菌的Sfb3、Mpg1、Gas1、Seb1、Crz1和Tps1的蛋白質的破壞或生成減少，與突變前的親本株相比能夠以更低的攪拌數維持深層培養中的好氧性發酵時的溶解氧量。另外，專利文獻7中記載，如果破壞木霉屬菌的BXL1基因，則能夠抑制培養液的溶解氧飽和度的降低。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1:日本特表2013-533751號公報

專利文獻2:日本特表2014-513529號公報

專利文獻3:日本特表2014-513530號公報

專利文獻4:日本特表2014-513531號公報

專利文獻5:日本特表2014-513532號公報

專利文獻6:日本特表2014-513533號公報

專利文獻7:國際公開第2017/170917號

發明內容

發明要解決的課題

如上所述，使用里氏木霉進行蛋白質的制造時，抑制培養液中的溶解氧濃度的降低、將其保持在一定以上是非常重要的。本發明者們考慮，如果在使用里氏木霉利用液體培養制造蛋白質時，能夠將培養液的粘度保持得較低，則即使在將培養規模大型化的情況下，也能夠降低攪拌所需的能量，并能夠抑制培養液中的溶解氧飽和度的降低。

因此本發明的課題是獲得培養液的粘度降低的里氏木霉的突變株和提供使用該里氏木霉的突變株的蛋白質的制造方法。

用于解決課題的手段

本發明者為了特定能夠將培養液的粘度保持得較低的里氏木霉的基因而進行了深入研究，結果發現，通過培養在包含序列號8所示的氨基酸序列的多肽中具有突變的里氏木霉的突變株，優選為進一步在選自包含序列號6、7、9、10的任一項所示的氨基酸序列的多肽中的1種以上多肽中具有突變的突變株，能夠將培養液的粘度保持得較低，進而能夠抑制培養液中的溶解氧飽和度的降低，從而完成了本發明。

即，本發明由以下(1)～(14)構成。