[發明專利]涉及基于適體的可逆細胞選擇的組合物和方法

在審

• 申請號: 201980060449.8
• 申請日: 2019-07-16
• 公開（公告）號: CN112805384A
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發明（設計）人: 蘇西·H.·汶;邁克爾·延森;納塔利·卡切洛夫斯基;伊恩·卡德爾
• 申請（專利權）人: 華盛頓大學;西雅圖兒童醫院(DBA西雅圖兒童研究所)
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/569
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 王芬;楊國強

1.一種用于從包含多種細胞類型的生物樣品中分離感興趣的細胞的方法，所述方法包括：

a.在允許形成與適體結合的細胞的條件下，使所述生物樣品與適體接觸，所述適體特異性結合對所述感興趣的細胞具有特異性的細胞表面標志物；

b.將所述與適體結合的細胞與未與適體結合的細胞分開；以及

c.通過破壞所述適體與所述細胞表面標志物的結合來回收所述感興趣的細胞，

從而從所述生物樣品中分離所述感興趣的細胞。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述感興趣的細胞是活的。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述感興趣的細胞是白細胞。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述感興趣的細胞是淋巴細胞或單核細胞。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述感興趣的細胞是T細胞。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所述感興趣的細胞是CD3+細胞、CD4+細胞、CD8+細胞。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中，所述適體包含標記。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中，分開步驟(b)包括使用第一固體支持物或相變劑。

9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其中，所述適體(i)綴合或固定至第一固體支持物；和/或(ii)被親和對的第一成員標記。

10.如權利要求9所述的方法，其中，分開步驟(b)包括(i)從所述生物樣品中去除通過所述適體結合至所述第一固體支持物的所述與適體結合的細胞；或(ii)添加帶有所述親和對的第二成員的第二固體支持物，以允許通過所述親和對的所述第一成員和所述第二成員的相互作用使所述適體物理締合至所述第二固體支持物，并從所述生物樣品中去除所述與適體結合的細胞。

11.如權利要求9或10所述的方法，其中，所述適體綴合至相變劑。

12.如權利要求9-11中任一項所述的方法，其中，接觸步驟(a)在所述相變劑處于溶液相的條件下進行；其中，分開步驟(b)包括誘導所述相變劑從溶液中沉淀，從而從所述生物樣品中去除與適體結合的細胞。

13.如權利要求8-12中任一項所述的方法，其中，所述第一固體支持物和/或所述第二固體支持物包括磁響應珠。

14.如權利要求8-12中任一項所述的方法，其中，所述第一固體支持物和/或所述第二固體支持物包括聚合物、金屬、陶瓷、玻璃、水凝膠或樹脂。

15.如權利要求13所述的方法，其中，分開步驟包括使所述樣品經受磁場，從而將包含與適體結合的細胞的固體支持物與所述生物樣品分開。

16.如權利要求1-15中任一項所述的方法，其中，逆轉劑包括聚陰離子、小分子或寡核苷酸或寡核苷酸模擬物，所述寡核苷酸或寡核苷酸模擬物包含與所述適體的序列充分互補的序列以與所述適體雜交，從而破壞所述適體與所述細胞表面標志物的結合。

17.如權利要求1-16中任一項所述的方法，其中，所述與適體結合的細胞包含對選定的標志物對呈雙重陽性的細胞，所述標志物對包括所述適體所結合的標志物。

18.如權利要求1-17中任一項所述的方法，其中，分離的細胞級分包含對選定的標志物對呈雙重陽性的細胞，所述標志物對包括所述適體所結合的標志物。