[發明專利]用于腎臟移植后BK病毒性腎病風險分層的方法

在審

• 申請號: 201980053823.1
• 申請日: 2019-06-18
• 公開（公告）號: CN112955743A
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: Y·陶菲克;A·杜巴克;M·德凱澤
• 申請（專利權）人: 巴黎-薩克雷大學;國家健康科學研究所;法國公立援助醫院
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C12Q1/6888
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;程云

1.一種評估腎臟移植的患者中發生BK病毒(BK-v)腎病的風險的方法，所述方法包括以下步驟：

a)測量所述患者的生物樣本中BK-v的病毒載量，

b)測量來自所述患者的生物樣本中BK-v病毒特異性CD4⁺或CD8⁺記憶T細胞應答的歸一化強度，所述歸一化是相對于步驟a)中測量的BK-v病毒載量進行的，和

c)確定腎臟供體與所述患者的HLA I和II之間的不相容性的數量。

2.根據權利要求1所述的方法，其中然后匯編三個參數a)、b)和c)，以創建患者將發生BK病毒腎病的風險分層指數。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中在步驟a)中通過對來自所述患者的全血或血漿樣本進行定量PCR來測量BK-v病毒載量。

4.根據權利要求1、2或3所述的方法，其中通過以下確定步驟b)中測量的BK-v特異性CD4⁺或CD8⁺記憶T細胞的應答：使所述患者的外周血單個核細胞與BK-v病毒肽接觸、以及在培養4至7天后，通常在培養5天后，評估存在于所述單個核細胞中的T細胞的增殖。

5.根據權利要求4所述的方法，其中在所述肽存在時，通過培養4至7天后，通常在培養5天后，確定具有稀釋的增殖標記物例的CD4⁺T細胞的比例，來測量所述增殖；例如，所述增殖標記物是CFSE。

6.根據權利要求4所述的方法，其中在所述肽存在時，通過培養4至7天后，通常在培養5天后，確定具有稀釋的增殖標記物例的CD8⁺T細胞的比例，來測量所述增殖；例如，所述增殖標記物是CFSE。

7.根據權利要求1至6中任一項所述的方法，其中在以下情況下得出發生BK病毒(BK-v)腎病的風險高的結論：

a)與每mL血液中10³拷貝BK-v病毒的病毒載量相關，

b)BK-v特異性CD4⁺或CD8⁺記憶T細胞應答的歸一化強度小于或等于100強度測量單位，并且

c)所述患者與移植腎臟的供體之間的不相容性數量小于或等于5。

8.根據權利要求1至7中任一項所述的方法，其中在以下情況下得出發生BK病毒(BK-v)腎病的風險低的結論：

a)與每mL血液中10³拷貝BK-v的病毒載量相關，

b)BK-v特異性CD4⁺或CD8⁺記憶T細胞應答的歸一化強度嚴格大于100強度測量單位，并且

c)所述患者與移植物供體之間的不相容性數量嚴格大于5。

9.一種在改變免疫抑制治療后用于評估腎臟移植患者對血液BK-v復制的應答的體外方法，其特征在于，在移植后以固定的時間間隔重復權利要求1至8中定義的方法。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，在每次改變治療之前和之后重復權利要求1至8中定義的方法。

11.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，大約每3至6個月重復權利要求1至8中定義的方法。

12.能夠并設計用于在全血中實施權利要求1至11所述方法的試劑盒，所述試劑盒包含：

a)用于進行BK-v病毒定量PCR的試劑，和

b)用于對全血進行權利要求4至6所述的免疫學方法的試劑。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其中所述試劑b)包含BK-v肽序列或多克隆淋巴細胞刺激肽序列，以及任選地淋巴細胞標記試劑。

14.根據權利要求12所述的試劑盒，其包含：

a)用于擴增BK-v基因組的部分的特異性引物，以及

b)BK-v肽序列，優選重疊肽的混合物，例如BKV VP1或BKV LT和/或多克隆淋巴細胞刺激肽序列，

以及，任選地

c)通過DNA提取進行定量PCR所需的試劑，和/或

d)用于淋巴細胞標記的試劑。