[發(fā)明專利]病毒和抗原純化和偶聯(lián)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980053601.X
• 申請日: 2019-06-11
• 公開（公告）號(hào): CN112566494B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: L·博爾登;S·D·修梅;J·莫頓;G·波格;B·布拉徹;H·A·海登;C·A·辛普森;N·帕坦;J·W·舍普赫德;K·斯沃普
• 申請（專利權(quán)）人: KBIO控股有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;A01K67/027;A61P37/04;C07K14/11;C12N5/0793;C12N5/0797
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 張佳鑫;陳揚(yáng)揚(yáng)

1.一種將蛋白質(zhì)和病毒偶聯(lián)的方法，包括：通過將病毒置于pH為4.5～5.5的環(huán)境中來活化病毒，其中，化學(xué)修飾病毒上的表面暴露的賴氨酸殘基，以促進(jìn)蛋白質(zhì)的胺靶向偶聯(lián)；和在活化步驟之后，在偶聯(lián)反應(yīng)中將病毒和蛋白質(zhì)混合，形成偶聯(lián)物混合物。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，病毒活化步驟在緩沖液中進(jìn)行18小時(shí)～72小時(shí)的時(shí)間段。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，蛋白質(zhì)是抗原，并且所述方法還包括：在混合步驟之前，通過純化抗原并將抗原暴露于5.50～6.50的pH的子步驟來制備抗原。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，還包括：從源抗原中收獲抗原，其中純化抗原包括從抗原中去除細(xì)胞碎片，濃縮抗原，進(jìn)行至少一種化學(xué)分離以從抗原中分離宿主細(xì)胞污染物，對抗原進(jìn)行親和色譜以洗脫抗原，并基于作為截留物的雜質(zhì)與作為滲透物的抗原之間的尺寸差異，對抗原進(jìn)行多峰色譜，以從抗原中分離殘留的雜質(zhì)。

5.如權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的方法，還包括：使病毒穿過包含多孔濾器的切向流過濾裝置以純化病毒，并使至少一種病毒穿過包含多孔膜的膜過濾裝置以濃縮病毒。

6.如權(quán)利要求1或3所述的方法，其中，蛋白質(zhì)是包含流感血凝素抗原（HA）的抗原，并且病毒是煙草花葉病毒（TMV）。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，TMV和HA以至少4：1的比例混合。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其中，TMV和HA以1：1～4：1的比例混合。

9.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的方法，還包括：使用至少一種含游離胺的液體淬滅偶聯(lián)反應(yīng)。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，還包括：在淬滅步驟之后，基于作為截留物的雜質(zhì)與作為滲透物的偶聯(lián)物混合物之間的尺寸差異，從偶聯(lián)物混合物中分離殘留的雜質(zhì)。

11.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，偶聯(lián)反應(yīng)使未偶聯(lián)的天然分子量的病毒外殼蛋白減少至少50％。

12.如權(quán)利要求1、7、8中任一項(xiàng)所述的方法，其中，病毒是TMV，并且TMV具有半徑，并且在活化步驟中，在TMV半徑增加了至少2.75倍之后，進(jìn)行將病毒和蛋白質(zhì)混合的步驟。

13.如權(quán)利要求1、7、8中任一項(xiàng)所述的方法，其中，病毒是TMV，并且TMV具有半徑，并且在活化步驟中，在TMV半徑增加到至少195?nm之后，進(jìn)行將病毒和蛋白質(zhì)混合的步驟。

14.一種包含病毒-抗原偶聯(lián)物的組合物，其通過權(quán)利要求1～13中任一項(xiàng)所述的方法制得，其中，抗原包含流感血凝素抗原（HA），所述HA與病毒上的表面暴露的賴氨酸殘基化學(xué)結(jié)合，并且至少50％的所述HA呈三聚體形式。

15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中，病毒是煙草花葉病毒（TMV）。