[發明專利]用于跟蹤和操縱細胞RNA的融合蛋白和融合核糖核酸

在審

• 申請號: 201980041185.1
• 申請日: 2019-04-22
• 公開（公告）號: CN112513250A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: E·葉;F·譚
• 申請（專利權）人: 加利福尼亞大學董事會
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/90
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳揚揚;錢文宇

1.一種組合物，其包含編碼以下物質的一種或多種多核苷酸：

(i)向導核苷酸序列可編程RNA結合蛋白；和

(ii)翻譯修飾蛋白。

2.如權利要求1所述的組合物，其中所述向導核苷酸序列可編程RNA結合蛋白包含Cas9，修飾的Cas9，Cas13a，Cas13b，CasRX/Cas13d，CasM及其各自的生物學等同物中的至少一種。

3.如權利要求2所述的組合物，其中所述向導核苷酸序列可編程RNA結合蛋白包含以下的至少一種：化膿性鏈球菌(Steptococcus pyogenes)Cas9(spCas9)，金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Cas9(saCas9)，新弗朗西斯菌(Francisella novicida)Cas9(FnCas9)，腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)Cas9(nmCas9)，嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)1 Cas9(St1Cas9)，嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)3 Cas9(St3Cas9)和側孢短芽孢桿菌(Brevibacillus laterosporus)Cas9(B1atCas9)。

4.如權利要求2或3所述的組合物，其中所述向導核苷酸序列可編程RNA結合蛋白是核酸酶失活的。

5.如前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述翻譯修飾蛋白是以下的至少一種：真核翻譯起始因子4E(EIF4E)(SEQ ID NO：52-59)，真核翻譯起始因子4E結合蛋白(EIF4E-BP1)(SEQ ID NO：61-62)，泛素相關蛋白2-樣(UBAP2L)(SEQ ID NO：64-71)及其各自的生物學等同物。

6.如前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述翻譯修飾蛋白由具有包含SEQ IDNO：52-55，SEQ ID NO：61，SEQ ID NO：64-67，SEQ ID NO：94-193，SEQ ID NO：285，SEQ IDNO：320-348及其各自的生物學等同物中至少一種的全部或部分的序列的多核苷酸編碼。

7.如前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述翻譯修飾蛋白具有氨基酸序列，該氨基酸序列包含以下的至少一種的全部或部分：SEQ ID NO：56-59，SEQ ID NO：62，SEQID NO：68-71及其各自的生物學等同物。

8.如前述權利要求中任一項所述的組合物，還包含接頭。

9.如權利要求8所述的組合物，其中所述接頭是肽接頭。

10.如權利要求9所述的組合物，其中所述肽接頭包含三肽GGS的一個或多個重復。

11.如權利要求8所述的組合物，其中所述接頭是非肽接頭。

12.如權利要求11所述的組合物，其中所述非肽接頭包括聚乙二醇(PEG)，聚丙二醇(PPG)，共聚(乙二醇/丙二醇)，聚氧乙烯(POE)，聚氨酯，聚磷腈，多糖，葡聚糖，聚乙烯醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯基乙醚，聚丙烯酰胺，聚丙烯酸酯，聚氰基丙烯酸酯，脂質聚合物，幾丁質，透明質酸，肝素或烷基接頭。

13.如前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述向導核苷酸序列可編程RNA結合蛋白與向導RNA(gRNA)，crispRNA(crRNA)或反式激活crRNA(tracrRNA)結合。

14.如前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述翻譯修飾蛋白的一個或多個激酶磷酸化結構域被突變。