[發明專利]蛋白質大環化

在審

• 申請號: 201980040981.3
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN112368379A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: T·N·格羅斯曼;M·皮雷吉莫羅;S·亨尼格;S·A·內巴徹
• 申請（專利權）人: 自由大學基金會
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/52;C12N9/64
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 張靜;張佳鑫

1.一種提高蛋白質的穩定性的方法，其中，所述蛋白質包含至少70個氨基酸，所述方法包括：

-a)提供包含三個半胱氨酸殘基的蛋白質，和

-b)使所述蛋白質與三價硫醇基反應性交聯劑接觸，使得所述交聯劑與三個半胱氨酸殘基的每一個形成共價鍵，優選地，與非交聯的蛋白質相比，所述方法提高蛋白質三級結構的穩定性。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述步驟a)包括修飾蛋白質以引入三個半胱氨酸殘基中的一個或多個。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述蛋白質包含至少第四半胱氨酸殘基，并且其中所述方法不導致在第四半胱氨酸和交聯劑之間形成共價鍵。

4.如權利要求3所述的方法，其中，所述蛋白質是酶，所述第四半胱氨酸是酶活性位點的一部分。

5.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述交聯劑具有C₃對稱性。

6.如前述權利要求中任一項所述的方法，其中，所述交聯劑具有式(I)：

其中，

Q是選自以下的核心結構：

Q中的每條虛線表示Q結合到L的位點，

每個L是獨立地選自以下的接頭：

其中，

每個U獨立地選自CH₂和CF₂，

V是CH₂，

W是CF₂，

X是NR、NH或O，

其中R是熒光團或親和柄，

n是2-8的整數，

m是1-4的整數，

o是2或3，和

v是2或3，

L中的每條虛線表示L結合到Q或E的位點，

每個E是親電子試劑，獨立地選自：

其中，

每個X獨立地選自NH和O，

Y選自：F、Cl、Br、Tos(O-SO₂-C₆H₄-CH₃)和Mes(O-SO₂-CH₃)，

Z是CH₂、NH-C(O)-CH₂或O-C(O)-CH₂，

E中的每條虛線表示E結合到L的位點。

7.如權利要求6所述的方法，其中，所述交聯劑具有式(III)：

其中n是1或n是2。

8.通過前述權利要求中任一項所述的方法獲得的穩定化的蛋白質。