[發(fā)明專利]基因組編輯方法、組合物、細(xì)胞、細(xì)胞制劑、以及細(xì)胞制劑的制造方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201980034209.0
• 申請(qǐng)日: 2019-03-28
• 公開（公告）號(hào): CN112534051A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 花園豐;原弘真;魚崎英毅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 學(xué)校法人自治醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;A61K31/7088;A61K31/713;A61P37/04;C12N5/074;C12N5/10
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 王程

1.一種基因組編輯方法，其是離體細(xì)胞中的基因組編輯方法，其特征在于，

通過在切割目標(biāo)基因組DNA的雙鏈時(shí)，對(duì)外源DNA的5’末端和3’末端中的至少一個(gè)末端進(jìn)行同源重組，從而將在5’末端和3’末端具有小于500bp的長(zhǎng)度的同源臂的外源DNA導(dǎo)入目標(biāo)基因組。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯方法，其中，

通過對(duì)所述外源DNA的5’末端和3’末端中的兩個(gè)末端都進(jìn)行同源重組，從而將外源DNA導(dǎo)入所述目標(biāo)基因組。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為血細(xì)胞或未分化細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為干細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為造血干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因組編輯方法，其中，

通過對(duì)所述外源DNA的5’末端和3’末端中的一個(gè)末端進(jìn)行同源重組，對(duì)另一個(gè)末端進(jìn)行非同源重組，從而將外源DNA導(dǎo)入所述目標(biāo)基因組。

7.一種基因組編輯方法，其是離體細(xì)胞中的基因組編輯方法，其特征在于，

通過對(duì)外源DNA的5’末端和3’末端中的兩個(gè)末端都進(jìn)行同源重組，從而將具有小于500bp的長(zhǎng)度的同源臂的外源雙鏈DNA導(dǎo)入目標(biāo)基因組。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為血細(xì)胞或未分化細(xì)胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為干細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)所述的基因組編輯方法，其中，

所述細(xì)胞為造血干細(xì)胞。

11.一種組合物，其特征在于，

含有外源雙鏈DNA，所述外源雙鏈DNA在其兩端具有小于500bp的長(zhǎng)度的同源臂。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中，

還含有目標(biāo)基因組DNA切割酶或編碼所述酶的DNA或mRNA。

13.根據(jù)權(quán)利要求11或12所述的組合物，其中，

所述組合物是藥用的。

14.根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)所述的組合物，其中，

所述組合物用于治療嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病。

15.一種細(xì)胞制劑的制造方法，所述細(xì)胞制劑用于治療嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病，所述細(xì)胞制劑的制造方法的特征在于，

在細(xì)胞中，通過在切割目標(biāo)基因組DNA的雙鏈時(shí)，對(duì)外源DNA的5’末端和3’末端中的至少一個(gè)末端進(jìn)行同源重組，從而將具有小于500bp的長(zhǎng)度的同源臂且具有所述目標(biāo)基因組DNA的野生型DNA的至少一部分的外源DNA導(dǎo)入所述細(xì)胞的基因組中。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的細(xì)胞制劑的制造方法，其中，

通過對(duì)所述外源DNA的5’末端和3’末端中的兩個(gè)末端都進(jìn)行同源重組，從而將外源DNA導(dǎo)入目標(biāo)基因組DNA。

17.根據(jù)權(quán)利要求15或16所述的細(xì)胞制劑的制造方法，其中，

所述細(xì)胞為血細(xì)胞或未分化細(xì)胞。

18.根據(jù)權(quán)利要求15至17中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞制劑的制造方法，其中，

所述細(xì)胞為干細(xì)胞。