[發明專利]基于金納米顆粒-適配體綴合物的抗體載體及其制備方法

在審

• 申請號: 201980028325.1
• 申請日: 2019-09-11
• 公開（公告）號: CN112334154A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 李剛奭;裵芝賢;廉智現;申恩京;朱玟柱;河慧晶
• 申請（專利權）人: 恩斯生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/44
• 分類號: A61K39/44;A61K47/69;A61K47/54;C12N15/115;A61K39/00
• 代理公司: 上海勝康律師事務所 31263
• 代理人: 樊英如;張華

本發明涉及基于金納米顆粒(AuNP)?適配體綴合物的抗體載體及其制備方法。根據本發明所述的抗體載體通過將免疫球蛋白G(IgG)Fc結構域特異性適配體或熒光素異硫氰酸酯(FITC)特異性適配體與AuNP結合來制備，并且可以通過將待遞送的抗體與適配體特異性結合而將抗體遞送至細胞核、細胞質和線粒體。另外，由于使用具有極低細胞毒性的AuNP，因此抗體載體不僅對人體無害，而且還可以通過反射各種波長的光來容易地檢測細胞中的位置，因此有望有效地用于診斷或治療疾病。

技術領域

本發明涉及基于金納米顆粒-適配體綴合物的抗體載體及其制備方法，更具體地，涉及通過將免疫球蛋白G(IgG)特異性適配體與金納米顆粒結合而具有將抗體遞送至細胞中的改進能力的抗體載體及其制備方法。

本申請要求于2019年6月5日提交的韓國專利申請No.10-2019-0066491的優先權和權益，其公開內容通過引用全部合并于此。

背景技術

抗體是能夠最有效地識別異物并與異物結合的生物分子，在過去的40億年中，它們一直保留在生物體中。抗體是Y形免疫球蛋白分子，其特異性識別靶分子即抗原，并以高親和力與抗原結合，并在脊椎動物免疫系統中起關鍵作用。通常，抗體從B淋巴細胞分泌或在B淋巴細胞的表面表達，并且具有高個體多樣性。由于這種多樣性和特異性，抗體可用作病原體或毒素的中和劑，它們是生物體中的靶標物質，募集免疫成分(補體，改善吞噬作用，源自自然殺傷細胞的細胞毒性抗體等)，各種診斷程序，或銷毀特定目標的治療。

特別地，由于對細胞外或細胞內抗原靶標的高度特異性，單克隆抗體(mAb)被批準在世界范圍內用于各種疾病的臨床使用。自1986年首次批準mAb以來，FDA已經批準了大約50種mAb。醫學中使用的基于抗體的療法可通過干擾蛋白質間相互作用或通過抑制信號轉導途徑來靶向目標蛋白質。然而，由于這些抗體中的大多數不能遞送至靶細胞，因此FDA批準的大多數抗體是靶向暴露于細胞表面的受體的抗體。例如，靶向在表面上高表達和暴露的HER2受體的曲妥珠單抗(Herceptin/Herclon)有效地用于治療HER2陽性乳腺癌患者。

必須克服其中必須通過與靶細胞中的生物分子綴合將抗體遞送至細胞中以用作有效治療劑的重大問題，并且根據納米生物技術的發展，已經做出努力以使用各種納米載體遞送抗體進入細胞中。但是，已經使用跨膜肽、透明質酸、殼聚糖、右旋糖酐、多不飽和脂肪酸、樹狀聚合物和碳納米管等各種物質將抗體遞送到細胞中，但是這些抗體僅遞送到體外培養的細胞中，并且對于體內遞送沒有有效的結果。而且，到目前為止開發出的技術只能通過包裝和修飾特異性抗體來用于有限的用途。

因此，迫切需要對遞送系統進行研究，以將抗體容易且有效地遞送至哺乳動物而沒有細胞毒性。

同時，金納米顆粒(AuNPs)是一種新型納米物質，其被開發為用于診斷的治療劑和造影劑，目前已廣泛用作CT、MRI、正電子發射斷層掃描(PET)、光聲成像(PA)或診斷放射學中的光學相干斷層掃描(OCT)的造影劑，尤其用作CT的造影劑。由于金(Au)的X射線吸收率和分子量均高于常規的碘造影劑，因此金的釋放速度較慢，因此成像時間較長；生物相容性較高，因此毒性較低；并且用作造影劑具有較高的適用性，其量比常規CT造影劑少。此外，AuNPs具有出色的體內穩定性、大表面積(其可用于附著各種分子)的獨特特性以及將生物分子(如肽和核酸)遞送到細胞中并被用作細胞治療劑的潛力。

屬于短長度的低聚物的適配體具有通過形成穩定的三維結構而以高親和性與目標物質特異性結合的特性，并且由于可以通過使用化學合成方法以低成本在短時間內大量生產且幾乎沒有批次間的差異，因此在生產率方面具有優異的優點。另外，適配體對周圍的pH和溫度具有非常高的穩定性，因此，最近，高度評價了其在環境和醫學領域等各種領域中例如用于檢測目標物質和開發疾病診斷傳感器的適用性。

因此，發明人打算開發一種抗體載體，其中適配體結合到具有優異的體內穩定性的AuNP上，以有效地遞送用于診斷或治療疾病的抗體。

發明內容