[發明專利]產生T細胞譜系細胞的方法

在審

• 申請號: 201980025370.1
• 申請日: 2019-02-14
• 公開（公告）號: CN112041431A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: J·C·阻尼加-普魯科爾;M·莫塔希亞米;A·特羅特曼-格蘭特
• 申請（專利權）人: 桑尼布魯克研究所
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;C07K14/705;C07K17/00;C12N5/071;C12N5/0735;C12N5/0789
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 張紅春

提供了產生T細胞譜系細胞的方法，其包括：(a)培養包含干細胞或祖細胞的樣本，其中所述干細胞或祖細胞具有綴合至懸浮支持物的Notch配體；以及(b)分離T細胞譜系細胞。在一個實施方案中，所述T細胞譜系細胞是T細胞祖細胞或成熟T細胞。還提供了組合物、試劑盒及其用途。

相關申請的交叉引用

本申請要求享有2018年2月14日提交的美國臨時申請No.62/630,497的優先權權益，其內容通過引用整體并入本文。

技術領域

本申請涉及用于產生T細胞譜系細胞的方法、組合物和試劑盒及其用途。具體地，本申請涉及用于產生祖細胞和成熟T細胞的方法、組合物和試劑盒及其用途。

背景技術

T細胞是適應性免疫的關鍵介質，并且可以被用作針對病原體和癌癥免疫療法的治療劑。造血干細胞移植(HSCT)為廣泛的惡性和非惡性病癥提供了有效的治療方法，但治療前所需的預處理方案會導致T細胞恢復的延時(Krenger等，2011)。與在骨髓(BM)中發育的大多數其他造血譜系相反，T細胞發育需要源自BM的祖細胞遷移到胸腺，其中進入的淋巴細胞祖細胞接收關鍵信號以誘導其分化為T譜系細胞(Shah和Zuniga-Pflucker，2014)。

通過胸腺基質細胞遞送至進入的淋巴細胞祖細胞的關鍵信號由Notch配體Delta-樣-4介導，Notch配體Delta-樣-4由皮質胸腺上皮細胞表達(Thompson和Zuniga-Pflucker,2011)。淋巴細胞祖細胞表達的Notch受體需要由載有Delta-樣-4的細胞誘導的機械拉力以有效誘導Notch受體的激活(D'Souza等，2010；Gordon等，2015；Meloty-Kapella等，2012)。另外，T細胞發育已證實需要恒定且高水平的Notch受體激活(Schmitt等，2004)。在沒有Notch1受體信號或Delta-樣-4所誘導信號的情況下，在胸腺中T細胞的發育不會發生，取而代之的是其他淋巴細胞譜系如B細胞的發育。因此，胸腺內T細胞的發育基于Notch信號通路(Zuniga-Pflucker，2004)。

在HSCT的情形下，處理和老化分別導致的胸腺功能障礙或萎縮，加之移植的HSC能力有限，使得淋巴細胞抑制胸腺中T細胞的發育程度(Porter和June，2005)。這導致免疫監測不足，使患者易于感染和/或復發癌癥，并且仍然是嚴重的臨床挑戰。

T細胞祖細胞(proT)的過繼轉移已成為一種有前途的策略，用以增強T細胞的重建，因為人或小鼠的proT細胞已經證實可定植入(engraft)免疫缺陷小鼠的胸腺，盡管它們源自異種或同種異體(Awong等，2009；Awong等，2013；Zakrzewski等，2006；Zakrzewski等，2008)。ProT細胞發育不成熟，并在宿主胸腺中經歷陽性和陰性選擇。因此，它們受限于受體的主要組織相容性復合體(MHC)產生的宿主耐受的T細胞，所述宿主耐受的T細胞可繞開與移植物抗宿主病(GVHD)相關的臨床挑戰。重要的是，proT細胞的定植(engraftment)可恢復胸腺的架構，并改善后續源自HSC的祖細胞在胸腺中的植入。除了其固有的再生醫學特性外，proT細胞還可以用T細胞受體(TCR)和嵌合抗原受體(CAR)進行工程化改造，從而賦予對腫瘤相關抗原(TAA)的特異性以治療癌癥，還可以用合成基因線路進行工程化改造以構建定制化的響應程序。