[發明專利]用于治療Angelman綜合征的方法和組合物

在審

• 申請號: 201980015559.2
• 申請日: 2019-02-27
• 公開（公告）號: CN111770758A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: M·J·澤爾卡;J·M·沃爾特;G·弗拉戈拉;J·M·西蒙;H·毛
• 申請（專利權）人: 北卡羅來納－查佩爾山大學
• 主分類號: A61K31/7088
• 分類號: A61K31/7088;C12N15/113;C12N15/63;A61P25/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 初明明;彭昶

本發明涉及用于治療Angelman綜合征的方法和組合物，其包括向受試者施用有效量的成簇規律間隔短回文重復序列（CRISPR）相關的核酸內切酶以及一種或多于一種引導RNA分子，所述引導RNA分子與受試者的細胞中的UBE3A?ATS中的靶核苷酸序列具有互補性。

優先權聲明

本申請根據35U.S.C.§119(e)要求于2018年2月27日提交的美國臨時申請序列號62/635,815的利益，所述美國臨時申請的全部內容引入本文作為參考。

政府支持的聲明

本發明在由美國國立衛生研究院(National Institutes of Health)授予的資助號ES024088的政府支持下完成。政府擁有本發明的某些權利。

發明領域

本發明涉及用于治療Angelman綜合征的方法和組合物。

關于電子提交序列表的聲明

替代紙質副本提供了以ASCII文本格式的序列表，其根據37C.F.R.§1.821提交，名稱為5470-839WO_ST25.txt，大小為577,227字節，于2019年2月27日生成并經由EFS-Web提交。該序列表就其公開內容在此引入本說明書作為參考。

發明背景

Angelman綜合征(AS)是由UBE3A的母系等位基因的缺失或突變引起的嚴重神經發育障礙。UBE3A在身體的幾乎所有細胞中雙等位基因表達，除了成熟神經元之外，其中父系等位基因由稱為UBE3A-ATS的超長非編碼RNA沉默。按照這種生物學，治療與AS相關的神經和行為功能障礙的最直接方法是使完整的父系UBE3A等位基因不沉默。CRISPR/Cas9技術可以用于永久修飾哺乳動物基因組的特定區域，例如當使用活性Cas9時。CRISPR/Cas9技術也可以用于阻遏在哺乳動物基因組的特定區域處的轉錄，例如當無效的Cas9單獨使用或與阻遏物結構域融合時。

本發明通過提供用于治療神經發育障礙例如Angelman綜合征的方法和組合物，克服了本領域中的先前缺點。

發明概述

在一個方面，本發明提供了使有此需要的人受試者中的父系UBE3A不沉默的方法，其包括向受試者施用有效量的成簇規律間隔短回文重復序列(CRISPR)相關的核酸內切酶(其是催化活性或無活性的/無效的)以及一種或多于一種引導RNA(gRNA)分子，所述引導RNA分子與受試者的細胞中的UBE3A-ATS中的靶核苷酸序列具有互補性。

在一個進一步方面，本發明提供了治療有此需要的受試者中的Angelman綜合征(AS)的方法，其包括向受試者施用有效量的成簇規律間隔短回文重復序列(CRISPR)相關的核酸內切酶(其是催化活性或無活性的/無效的)以及一種或多于一種引導RNA分子，所述引導RNA分子與受試者的細胞中的UBE3A-ATS中的靶核苷酸序列具有互補性。

附圖簡述

圖1.使完整的父系UBE3A等位基因不沉默的分子途徑。

圖2A-B.(2A)Ube3a-ATS經由轉錄干擾/碰撞機制阻斷了神經元中的父系Ube3a。(2B)邊界元件截斷了非神經元細胞中的Ube3a-ATS。X＝甲基化/印跡區域。

圖3A-D.(3A)在gRNA文庫中gRNA相對于基因和調控元件的位置。(3B)基因注釋。(3C)來自皮層神經元的Ribozero RNA-seq。(3D)調控元件標記。