[發(fā)明專利]表達(dá)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的間充質(zhì)干細(xì)胞及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201980010150.1
• 申請日: 2019-01-24
• 公開（公告）號: CN111989404A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 成永哲;李純旼;金慧娟
• 申請（專利權(quán)）人: 斯比根公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/12;C12N5/10;A61K35/28;A61K48/00;A61K38/18;A61P25/28;A61P25/16;A61P25/00;A61P9/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 隆翔鷹

本發(fā)明涉及包含對腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因的重組慢病毒、由上述慢病毒轉(zhuǎn)化的間充質(zhì)干細(xì)胞及利用其來大量生產(chǎn)表達(dá)BDNF蛋白質(zhì)的細(xì)胞治療劑的方法。由本發(fā)明的重組慢病毒轉(zhuǎn)化的間充質(zhì)干細(xì)胞可調(diào)節(jié)BDNF蛋白質(zhì)的表達(dá)時期，不僅呈現(xiàn)高的細(xì)胞增殖率及高的BDNF蛋白質(zhì)表達(dá)量，而且安全性優(yōu)秀，由此作為可實現(xiàn)大量生產(chǎn)且可維持相同效果的干細(xì)胞治療劑，可有用地使用于多種神經(jīng)疾病的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請主張2018年1月24日申請的韓國專利申請第10-2018-0008569號的優(yōu)先權(quán)，上述說明書全文是本申請的參考文獻(xiàn)。

本發(fā)明涉及包含對腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)蛋白質(zhì)進(jìn)行編碼的基因的重組慢病毒載體及由利用上述載體來制備的慢病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

背景技術(shù)

腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor，BDNF)表達(dá)在我們身體中的腦、網(wǎng)膜、運動神經(jīng)細(xì)胞、腎臟、唾液、前列腺等，并表達(dá)在腦的海馬(hippocampus)、大腦皮質(zhì)(cerebral cortex)、下丘腦(hypothalamus)、基底前腦(basalforebrain)等。BDNF在長期記憶(long-term memory)中占據(jù)重要部分，對于學(xué)會東西的動物而言，BDNF mRNA在腦的海馬部位以高水準(zhǔn)進(jìn)行表達(dá)。據(jù)報告，在這種海馬部位增加表達(dá)與學(xué)習(xí)水準(zhǔn)也相關(guān)聯(lián)。

并且，BDNF是對促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生成的神經(jīng)營養(yǎng)因子呈現(xiàn)最優(yōu)秀的活性的物質(zhì)。實際上，對于BDNF遺傳上完全被去除的老鼠來說，出生后呈現(xiàn)嚴(yán)重的死亡率，并且在小腦、嗅球(olfactory bulb)、視覺皮質(zhì)(visual cortex)和耳蝸(cochlear)等上觀察到神經(jīng)細(xì)胞的損失。相反，在BDNF基因被部分去除的情況下，神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)減少，觀察到海馬部位的長期增益(long-term potentiation，LTP)和感覺及痛覺系統(tǒng)的變化，并觀察到行動學(xué)問題和精神學(xué)問題。

另一方面，BDNF在用于治療神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative disorder)的藥的開發(fā)中作為靶物質(zhì)來應(yīng)用。BDNF與阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)、帕金森病(Parkinson's disease，PD)、亨廷頓病(Huntington's disease，HD)、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(Amyotrophic lateral sclerosis，ALS)等之類的神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的實驗證據(jù)從1990年代初期開始報告。在多項研究中已報告BDNF的遺傳異常與疾病相關(guān)聯(lián)。實際上，患有這些神經(jīng)退行性疾病的患者身上的BDNF量比正常人少。尤其，與亨廷頓病相關(guān)的問題中已報告通過多種細(xì)胞及動物實驗，一旦疾病有進(jìn)展，在BDNF輸送上就存在問題。以往嘗試著通過將減少的BDNF供給到外部的方法治療疾病，但是目前為止存在難以將BDNF有效傳遞至腦的問題。

另一方面，全世界都在開發(fā)利用細(xì)胞的治療方法，并且對利用成體干細(xì)胞的細(xì)胞治療劑正在進(jìn)行多項研究。作為成體干細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem cell；MSC)是可分化為骨、軟骨、肌肉、脂肪、成纖維細(xì)胞等的多能(multipotent)細(xì)胞。上述MSC可從骨髓、臍帶血、脂肪等多種成體組織中比較容易獲得。MSC具有向炎癥或損傷部位移動的特異性，作為用于傳遞治療藥物的傳遞體也具有大的優(yōu)點。并且，通過抑制或激活T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹狀細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞之類的免疫細(xì)胞的功能，可調(diào)節(jié)人體的免疫功能。不僅如此，MSC還具有可在試管內(nèi)(in vitro)比較容易培養(yǎng)的優(yōu)點。通過這種特性，正在活躍進(jìn)行將MSC用作細(xì)胞治療劑的研究。

但是，即使具有這種MSC的優(yōu)點，在生產(chǎn)可作為細(xì)胞治療劑使用在臨床的級別的MSC存在如下問題。第一、在MSC的增殖上受限，因此難以大量生產(chǎn)該MSC。第二、獲得的MSC與多種細(xì)胞混合，在生產(chǎn)時難以維持相同的效果。第三、僅利用MSC時的治療效果并不好。最后，注入到人體的MSC有可能在體內(nèi)成為癌細(xì)胞。