[發明專利]一種毒三素鏈霉菌及其在制備利普司他汀中的應用

有效

• 申請號: 201310302148.6
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103468603A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 李立似;方軍;蔣彩霞;金利琴;何金芳;劉金國
• 申請（專利權）人: 杭州華東醫藥集團生物工程研究所有限公司;杭州中美華東制藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/02;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種新型微生物及其用途和應用，尤其涉及一種毒三素鏈霉菌及其在制備利普司他汀中的應用。

背景技術

利普司他汀為發酵產物，通過毒三素鏈霉菌（Streptomyces?toxytricini）發酵液培養，得到發酵濾液，再通過提取、濃縮得到利普司他汀濃縮液，經一系列純化工藝如氫化、結晶、離心等可最終獲得奧利司他成品。而奧利司他是一種長效和強效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，它通過與胃和小腸腔內胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性絲氨酸部位形成共價鍵使酶失活而發揮治療作用，失活的酶不能將食物中的脂肪，主要是甘油三酯水解為可吸收的游離脂肪酸和單酰基甘油。未消化的甘油三酯不能被身體吸收，從而達到減少熱量攝入，控制體重的目的。服用奧利司他可以降低與肥胖相關的危險因素和與肥胖相關的其它疾病的發病率，包括高膽固醇血癥、2型糖尿病等。

一般的利普司他汀產生菌，生產能力不穩定，產量較低，發酵副產物較多，雜質較多，導致后期提取、氫化、純化成奧利司他的工藝較為復雜，大大地增加了后序的提純難度，難以獲得高純度的最終產物，從而無法產業化生產。

發明內容

本發明的目的是針對上述問題，提供一種發酵單位高、能穩定生產、產量高且副產物少的利普司他汀產生菌。

一種毒三素鏈霉菌ST-5423，分類命名為毒三素鏈霉菌ST-5423（Streptomyces?toxytricini?ST-5423），由中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號為：CCTCC?M2013312，保藏日期為：2013年07月04日。

毒三素鏈霉菌ST-5423的菌株的菌落特征：基內菌絲發育良好，無色，菌絲細長分枝，直徑為0.8～0.9μm；氣生菌絲生長豐茂、粉狀，孢子絲著生在氣生菌絲體上，孢子絲直、柔曲，孢子呈橢圓形至柱形，表面光滑，直徑為0.65～1.0×1.0～2.0μm，成熟孢子鏈孢子個數在10個以上。酵母浸出物淀粉瓊脂：氣絲白色至肉桂粉色。

根據微生物形態學及國外相關資料的描述，結合毒三素鏈霉菌ST-5423的菌株的各種培養特征和形態特征，該毒三素鏈霉菌ST-5423的菌株應屬于毒三素鏈霉菌屬，定名為Streptomyces?toxytricini?ST-5423。

本發明的另一個目的是提供該菌株在制備利普司他汀中的應用。

毒三素鏈霉菌ST-5423的菌株可應用于發酵制備利普司他汀。該制備方法包括下列步驟：

a.?發酵菌株采用毒三素鏈霉菌ST-5423的菌株；

b．菌株培養：按常規方法制備的斜面，挖取斜面菌苔塊，接入搖瓶進行種子培養得搖瓶種子液；將搖瓶種子液接種于搖瓶發酵培養基中或種子罐中培養；將種子罐培養液接種于發酵罐培養基培養，收集發酵液；?優選在發酵培養過程中無需進行補料，待種子罐菌絲生長良好接入發酵罐后，根據發酵液實際情況從pH、菌濃、攪拌轉速、溶氧及菌絲鏡檢情況等方面來控制發酵過程即可。

c.?發酵產物提取：提取、濃縮、氫化、結晶、制備柱、結晶和干燥。

其中所述的步驟b為：按常規方法制備的斜面，挖取斜面菌苔塊接入搖瓶種子培養基，150～250rpm，培養24～48小時，得搖瓶種子液；將搖瓶種子液按種子罐培養基體積0.1～2%的接種量接種于種子罐。攪拌速度80～120rpm，培養24～48h；將種子罐培養液按發酵培養基體積5～15％的量接種于發酵罐培養基，攪拌速度120～200rpm，發酵培養130～240小時，收集發酵液；其中培養溫度均為26～28℃。

本發明還公開了培養基：按重量體積比計，搖瓶、種子罐培養過程中的碳源為0.2～5.0％，優選0.5～4.5％，最優選為0.5～3.0％；氮源為0.2～4.0％，優選0.5～3.5％，最優選為0.5～3.0％；無機鹽為0.02～2.0％，優選0.02～1.5%，最優選0.02～1.3%；其余為水；

其中碳源選自麥芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、淀粉水解糖、糖蜜、糊精、甘油、葡萄糖、土豆浸出粉、土豆糊精、燕麥片的一種或幾種；優選麥芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、糊精、甘油、葡萄糖、土豆糊精、燕麥片中的一種或幾種；最優選麥芽糊精、淀粉、可溶性淀粉、甘油、葡萄糖、土豆糊精中的一種或幾種。