[發明專利]結直腸癌術后復發危險分層檢測方法

在審

• 申請號: 201911412257.7
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111020035A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 周福祥;徐國增;孫雪花
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 徐曉琴

本發明屬于疾病檢測技術領域，具體涉及一種結直腸癌術后復發危險分層檢測方法。所述方法包括：收集結直腸癌患者的腫瘤組織，提RNA并逆轉錄成cDNA，以cDNA作為模板PCR擴增出組織中9個mRNA分子和內參基因GAPDH的CT值，計算各mRNA表達量EV，將9個mRNA分子的表達量EV代入危險評分公式中，計算得到患者的危險評分RS，根據危險評分RS的數值對患者復發風險進行危險分組劃分。

技術領域

本發明屬于疾病檢測技術領域，具體涉及一種結直腸癌術后復發危險分層檢測方法。

背景技術

結直腸癌(CRC)是全球第三大腫瘤，約60％的CRC患者診斷時即為II/III期。盡管新診斷和治療技術取得了顯著進步，但手術切除后腫瘤復發仍然是最困難的挑戰。準確預測高風險復發對于確定輔助治療的潛在候選患者至關重要。TNM分期系統對于預測手術切除后腫瘤復發具有局限性。因此，迫切需要用于預測腫瘤復發的新型分子標記物來改善個性化治療。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，目的在于提供一種結直腸癌術后復發危險分層檢測方法。

為實現上述發明目的，本發明所采用的技術方案為：

一種結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，包括如下步驟：

(1)收集結直腸癌患者的腫瘤組織，提取腫瘤組織總RNA，逆轉錄成cDNA；

(2)以cDNA作為模板進行PCR擴增反應，確定腫瘤組織中9個mRNA分子和內參基因(GAPDH)的CT值，然后確定每個mRNA分子的ΔCT，具體如下:ΔCT＝CT_mRNA-CT_GAPDH，我們根據ΔCT確定每個mRNA的相對表達量(Relative Value,RV)，具體如下：RV＝2^-ΔCT；

(3)為將9個mRNA分子的表達量(Expression Value,EV)確定在特定的合適范圍內，我們采用特定的公式根據相對表達量(RV)計算各mRNA分子的表達量(EV)作為建模變量，具體如下：EV＝log₂(RV×10000+1)；

(4)將9個mRNA分子的表達量(EV)代入危險評分公式中，計算患者的危險評分數值(Risk Score,RS)，根據危險評分數值對患者復發風險進行危險分組劃分。

上述方案中，所述9個mRNA的基因名為：KLK10、DUSP27、CXCL13、SCG2、C2orf40、MFAP4、C2CD4A、CHGA和CHGB，具體如下表1所示。

表1 9個mRNA全名和基因編號

上述方案中，所述PCR擴增反應中，用于擴增9個RNA的引物序列及內參基因GAPDH的序列如下表2所示：

表2 引物序列

上述方案中，所述危險評分公式為：ln(RS)＝0.44216×EV_C2orf40+0.13135×EV_DUSP27+0.11162×EV_KLK10-0.10893×EV_C2CD4A+0.12615×EV_SCG2-0.10634×EV_CXCL13+0.0779×EV_CHGA+0.09549×EV_CHGB+0.08248×EV_MFAP4-0.62326。

上述方案中，所述根據危險評分數值對患者的復發風險進行危險分組劃分的具體規則為：若危險評分大于0.9803，則將患者劃分為高危組，反則將患者劃分為低危組。