[發明專利]結直腸癌術后復發危險分層檢測方法

在審

• 申請號: 201911412257.7
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111020035A
• 公開（公告）日: 2020-04-17
• 發明（設計）人: 周福祥;徐國增;孫雪花
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 徐曉琴

1.一種結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)收集結直腸癌患者的腫瘤組織，提取腫瘤組織總RNA，逆轉錄成cDNA；

(2)以cDNA作為模板進行PCR擴增反應，確定腫瘤組織中9個mRNA分子和內參基因GAPDH的CT值，然后確定每個mRNA分子的ΔCT，我們根據ΔCT確定每個mRNA的相對表達量RV，所述ΔCT＝CT_mRNA-CT_GAPDH，所述RV＝2^-ΔCT；

(3)為將9個mRNA分子的表達量EV確定在特定的合適范圍內，我們采用特定的公式根據相對表達量RV計算每個mRNA分子的表達量EV作為建模變量，具體如下：EV＝log₂(RV×10000+1)；

(4)將9個mRNA分子的表達量EV代入危險評分公式中，計算得到患者的危險評分RS，根據危險評分RS的數值對患者復發風險進行危險分組劃分。

2.根據權利要求1所述結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，其特征在于，所述9個mRNA的基因名為：KLK10、DUSP27、CXCL13、SCG2、C2orf40、MFAP4、C2CD4A、CHGA和CHGB。

3.根據權利要求1所述結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，其特征在于，所述PCR擴增反應中，用于擴增9個mRNA及內參基因GAPDH的引物序列如下所示：

4.根據權利要求1所述結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，其特征在于，所述危險評分公式為：ln(RS)＝0.44216×EV_C2orf40+0.13135×EV_DUSP27+0.11162×EV_KLK10-0.10893×EV_C2CD4A+0.12615×EV_SCG2-0.10634×EV_CXCL13+0.0779×EV_CHGA+0.09549×EV_CHGB+0.08248×EV_MFAP4-0.62326。

5.根據權利要求1所述結直腸癌術后復發危險分層檢測方法，其特征在于，所述根據危險評分RSDE數值對患者復發風險進行危險分組劃分的具體規則為：若危險評分大于0.9803，則將患者劃分為高危組，反則將患者劃分為低危組。