[發明專利]蚯蚓腸道內容物強化土壤中磺胺類抗生素消減的方法

有效

• 申請號: 201911409957.0
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN111069275B
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 孫明明;晁會珍;鄭曉璇;王鑫偉;胡鋒
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: B09C1/10
• 分類號: B09C1/10;B09C1/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

1.蚯蚓腸道內容物在強化土壤中磺胺類抗生素消減中的應用，其特征在于，具體步驟為：首先選取成熟的且具有明顯環帶的新鮮蚯蚓，對其體表清洗后，新鮮蚯蚓的體重在4±1g，清洗時選用0.9%的生理鹽水，生理鹽水清洗后，放在無菌培養皿中清腸6h后蚯蚓清腸完全，然后添加到人工配制的磺胺類抗生素污染的土壤中，其中磺胺類抗生素的濃度為10-100 mg/kg，在避光和室溫的條件下培養2周后，取出蚯蚓并再次進行體表清洗，解剖獲取新鮮蚯蚓腸道內容物，從麻醉蚯蚓開始，到獲取腸道內容物結束，時間控制在5min之內，所述解剖獲取新鮮蚯蚓腸道內容物的步驟為：待蚯蚓停止排糞后，用50%無水乙醇將蚯蚓浸泡2min，觀察蚯蚓在無水乙醇中的生理狀態，當蚯蚓停止扭動身軀并逐漸靜止，但仍能觀察到蚯蚓心臟跳動時，取出蚯蚓，再次用0.9%的生理鹽水清洗蚯蚓體表2-3遍，用濾紙擦去蚯蚓體表0.9%的生理鹽水；解剖蚯蚓的位置從雄孔下方開始，直到肛門位置結束，沿著中間偏左或者偏右的位置進行解剖，解剖時腹部朝上；解剖完蚯蚓，采用不銹鋼小刀沿蚯蚓環帶下方至肛門方向獲取腸道內容物，并轉移至離心管中，插入冰浴暫存，為保證蚯蚓腸道內容物的新鮮，時間控制在10s之內；向暫存蚯蚓內容物的離心管中加入0.5mL的PBS緩沖液，再采用渦旋儀將內容物混合均勻，渦旋儀的轉速為1000rpm，渦旋時間為10s；采集自然環境中受到磺胺類抗生素污染的不同類型土壤，去除雜質，對土壤進行破碎篩分，所述采集自然環境中受到磺胺類抗生素污染的不同類型土壤的步驟為：依據5點采樣法或S型采樣法獲取不同類型磺胺類污染農田土壤，并去除土壤中的草根、樹葉、石頭雜質，再對土壤進行破碎篩分，得到粒徑小于100目的土粒；然后向不同磺胺類抗生素污染土壤中按比例添加蚯蚓腸道內容物，所述土壤與蚯蚓腸道內容物的質量比為5000:1、2500:1或1000:1，進行人工培養1-2月后完成修復，人工培養過程中保持周圍溫度25±2℃，并且維持土壤的含水率在20±2%。