[發明專利]消除免疫透射比濁法中免疫復合物干擾的方法、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201911404005.X
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN113125692A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 黃斌;丁俊;張裕平
• 申請（專利權）人: 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N1/34;G01N1/40;G01N21/31;G01N21/82
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 李昂;張穎玲

本申請公開了一種消除免疫透射比濁法中免疫復合物干擾的方法、試劑盒及檢測方法。其中用于免疫透射比濁法的樣本預處理方法包括以下步驟：將含有沉淀劑的預處理試劑與樣本混合得到混合液；和對所述混合液離心，取上清液作為待測試樣。本發明的預處理方法避免了稀釋法帶來的測試樣中被測物濃度過低，導致無法測出，或者稀釋倍數不足導致測試不準確的問題，且不對后續檢測產生影響。

技術領域

本申請涉及免疫透射比濁檢測方法，特別涉及消除免疫復合物對檢測干擾的方法。

背景技術

免疫透射比濁法是免疫檢測中常用的一種方法。其檢測的反應原理為：試劑中的抗體與樣本中的抗原反應，形成免疫復合物，在聚乙二醇或其他沉淀劑作用下，從液體中析出，使反應體系渾濁，通過測定體系的光學特性，如吸光度，可由渾濁程度求得樣本中抗原的濃度。

在檢測中，往往出現因抗原和抗體的比例不合適，而導致檢測結果偏低，甚至出現假陰性的情況。以抗原過量為例，以抗體-抗原沉淀的量相對于抗原的量作圖時，在抗原量增大的一端出現偏離正常曲線的鉤狀(HOOK)曲線的現象被稱為鉤狀效應。鉤狀效應是由于待測的抗原或抗體的量大大過剩時，出現了可溶性復合物，導致檢測結果的偏差。對于這種情況，往往采取對樣本進行事先稀釋的方法，以獲得準確結果。

此外，樣本中還可能存在本身就含有免疫復合物的情況。對于樣本中存在的免疫復合物為包含被測物的情況，通常采用解離劑來處理樣本，使復合物中的抗原和抗體分開，再進行測試。

然而，對于樣本中存在非被測物的免疫復合物的情況，卻鮮少被關注。當樣本與檢測試劑混合后，檢測試劑中的免疫復合物聚集試劑(如聚乙二醇)同樣會使樣本中的非被測物免疫復合物發生沉淀，從而對檢測結果造成干擾。使用解離劑在一定程度上可避免樣本中本身含有免疫復合物影響測試的情況，但是加入解離劑一方面可能破壞蛋白結構，對被測物的進一步檢測造成影響；另一方面，解離劑在測試時會進一步被檢測試劑稀釋，而本已解離的抗原抗體又會重新結合在一起。特別是對于干擾物較多的情況，解離劑并不能很好地消除其影響。

對于本身存在免疫復合物干擾的樣本，傳統方法是對樣本進行稀釋后再測試。但是有時由于需要稀釋幾倍甚至十倍以上才能消除干擾，造成稀釋后樣本濃度降低到檢測系統的檢測范圍以下，結果也同樣不準確；有時被測物濃度較低，僅幾倍的稀釋就會造成被測物濃度低于檢測范圍，造成結果不準確。

因此，仍需要一種能有效消除樣本本身存在免疫復合物干擾的檢測方法。

發明內容

因此，本發明的目的在于提供一種有效消除樣本本身存在免疫復合物干擾的方法，該方法不影響被測物的檢測，特別是對于含低濃度被測物的樣本，與傳統的稀釋法相比，該方法不影響最低檢測限，能夠獲得更為準確的結果。

為此，本發明的第一方面提供一種用于免疫透射比濁法的樣本預處理方法，所述方法包括以下步驟：將含有沉淀劑的預處理試劑與樣本混合得到混合液；和對所述混合液離心，取上清液作為待測試樣。

根據本發明的具有實施方式，所述沉淀劑為聚乙二醇(PEG)。根據優選的實施方式，所述聚乙二醇的分子量為2000～35000的聚乙二醇，更優選所述聚乙二醇的分子量為4000～20000。

可用于對樣本進行預處理的所述預處理試劑可以是固體形式或溶液形式。

對于所述預處理試劑為固體形式的情況，所述沉淀劑也是以固體形式包含在預處理試劑中。在該情況下，所述預處理試劑以固體形式直接添加至樣本中，或者可事先用少量溶劑使所述預處理試劑溶解后再與所述樣本混合。以固體形式添加時，沉淀劑的添加量可以為使最終混合后的樣本中含有20～50g/L的沉淀劑。

較優地，所述預處理試劑為溶液形式。在該實施方式中，所述沉淀劑可以以任何合適的方式存在于所述預處理試劑中。例如，沉淀劑可以為懸浮的固體微粒形式，懸浮的乳膠粒形式或溶解的形式包含在所述預處理試劑中。