[發明專利]精神分裂癥小鼠模型前額皮層circRNA測序分析試劑盒

在審

• 申請號: 201911403850.5
• 申請日: 2019-12-31
• 公開（公告）號: CN110904223A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 張理義;盧翠英
• 申請（專利權）人: 張弛
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種精神分裂癥神經發育小鼠模型前額皮層生物標記物，其特征是，所述標記物為circRNA12、circRNA13、circRNA15、circRNA20。

2.一種權利要求1所述的精神分裂癥神經發育小鼠模型前額皮層生物標記物的檢測方法，其特征是，包括以下步驟：腦組織采集對照組(NC)、精神分裂癥模型組(SZ)、治療組(Treated)三組小鼠均于100天斷頭處死并剝離全腦。RNA抽提、建庫提取樣品總RNA，并使用試劑盒ribo-zero消化核糖體RNA后；加入打斷試劑將RNA打斷成短片段，以打斷后的RNA為模板,用六堿基隨機引物合成一鏈cDNA，然后配制二鏈合成反應體系合成二鏈cDNA，在cDNA二鏈合成時以dUTP代替dTTP,然后連接不同接頭，再利用UNG酶法將含有dUTP的一條鏈進行消化，只保留連接鏈不同接頭的cDNA一鏈；使用試劑盒純化cDNA一鏈；純化的cDNA一鏈再進行末端修復、加A尾并連接測序接頭，然后進行片段大小選擇，最后進行PCR擴增；構建好的文庫用Agilent 2100 Bioanalyzer質檢合格后，使用Illumina HiSeqTM 2500或其他測序儀測序。Real-Time PCR(RT-PCR)驗證根據測序結果及標準RNA序列，設計circRNA探針及引物。依據差異倍數FC≥2、聚類分析結果中處于不同簇、每個樣本均能檢測出三個條件分別挑選小鼠前額皮層10個差異circRNA進行RT-RCR檢測。每個circRNA樣本平行重復3次。比較NC組和SZ組的表達差異是否顯著，選取有顯著差異的circRNA再在SZ組和Treated組樣本中進行RT-PCR檢測。

3.一種根據權利要求1或2所述的精神分裂癥神經發育小鼠模型前額皮層生物標記物的試劑盒，其特征是，其能夠測定circRNA12、circRNA13、circRNA15、circRNA20表達水平。

4.一種精神分裂癥神經發育小鼠模型轉歸的生物標記物，其特征是，所述標記物為circRNA20。

5.一種權利要求4所述的精神分裂癥神經發育小鼠模型轉歸生物標記物的檢測方法：其特征是，取適量接受藥物治療后精神分裂癥神經發育小鼠模型的前額皮層組織，從中提取總RNA，并進行正太化校正后進行逆轉錄反應；反應完成后進行實時熒光定量PCR，得到circRNA20表達水平。以選擇經過測試在所有樣本中可以穩定檢測到的β-Actin作為RT-PCR實驗內參，以ΔCt值(ΔCt＝Cttarget-Ctβ-actin)表示目標RNA的相對表達水平；使用FPKM法(Fragments Per kb Per Million Reads)統計目標RNA表達量；采用NB(負二項分布檢驗)檢驗目標RNA差異顯著性。通過建立circRNA20表達水平的常模，得到標準數值。

6.根據權利要求4或5所述的一種精神分裂癥神經發育小鼠模型轉歸檢測的試劑盒，其特征是，其能夠測定前額皮層組織中circRNA20的含量。

7.一種提供circRNA靶基因網絡圖及前額皮層中差異circRNA GO/KEGG富集分析結果。