[發明專利]一種制備永生化樹突狀細胞的基因、載體、方法和永生化樹突狀細胞

有效

• 申請號: 201911397010.2
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111088270B
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 焦順昌;張嶸;陳小彬;陳紅利;陳寅
• 申請（專利權）人: 北京鼎成肽源生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K14/47;C12N15/867
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

1.一種制備永生化樹突狀細胞的基因，其特征在于，將ST40基因經linker與TAX2基因連接后，得到制備永生化樹突狀細胞的基因；

所述ST40基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述TAX2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根據權利要求1所述的基因，其特征在于，所述linker的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.一種制備永生化樹突狀細胞的載體，其特征在于，將權利要求1或2所述的基因插入原始載體中，得到制備永生化樹突狀細胞的載體。

4.根據權利要求3所述的載體，其特征在于，所述原始載體包括pCDH MSCV和/或pCDH-CMV。

5.一種制備永生化樹突狀細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將權利要求4所述的載體包裝慢病毒，得到包裝病毒，將所述包裝病毒感染樹突狀細胞，得到感染樹突狀細胞；

2)將滋養細胞接種于細胞培養器的上層培養室，將所述步驟1)得到的感染樹突狀細胞接種于細胞培養器的下層培養室，培養4～6周，除去CD3+細胞后繼續培養1～2周，除去CD3+細胞后繼續培養2個月以上，得到永生化樹突狀細胞。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)滋養細胞的制備包括：將外周血單個核細胞在含有質量百分含量為10％的FBS的1640培養基中培養過夜，得到滋養細胞。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟1)樹突狀細胞來源于外周血單個核細胞。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)滋養細胞的接種量為0.5～1.5×10⁶個/孔，所述感染樹突狀細胞的接種量為0.5～1.5×10⁶個/孔。

9.權利要求5～8任一項所述的方法制備得到的永生化樹突狀細胞，所述永生化樹突狀細胞的表型包括：CD3-、CD4+、CD8-、CD16-、CD56-、CD11c+、CD58+、CD40+、CD70+、CD80+、CD83+、CD86+、TCR-、CD11b-、CD197-、CD303-、CD1c-、CD205+、CD141和CD123+。