[發明專利]一種脂肪體及其在評價待測蛋白與脂滴相互作用中的應用

有效

• 申請號: 201911393670.3
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN111057136B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 劉平生;馬學婧;支澤侖;周暢
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N33/68;A61K47/24;A61K47/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

1.一種制備脂肪體的方法，包括步驟：a1）將磷脂和甘油三酯在緩沖液中進行渦旋以實現兩者的反應，然后進行離心，收集上層液相，從上層液相中分離得到脂肪體；

所述“從上層液相中分離得到脂肪體”包括如下步驟：

a2）將所述上層液相進行兩次以上的純化；每次純化的方法為：將上層液相與所述緩沖液混勻，然后使其分層，收集上層液相；

a3）將步驟a2）得到的上層液相與所述緩沖液混合，然后使其分層，收集下層液相，其中含有脂肪體；

所述步驟a2）中，所述“使其分層”是通過離心實現的，所述離心的參數為：18000～22000g、3～7min；

所述步驟a3）中，所述“使其分層”是通過離心實現的，所述離心的參數為：800～1200g、3～7min；

磷脂和甘油三酯的質量比為d1）至d6）中的任一種：d1）0.25～3:5；d2）3:5；d3）2:5；d4）1:5；d5）1:10；d6）1:20；

所述磷脂為DOPC和PI；

所述磷脂中，DOPC和PI的質量比為（4-249）：1。

2.采用權利要求1所述方法制備的脂肪體。

3.權利要求2所述脂肪體在制備人工脂滴、人工脂蛋白和/或藥物載體中的應用。

4.人工脂滴在制備藥物載體或制備藥物中的應用；所述人工脂滴是通過在權利要求2所述脂肪體上招募一種或幾種固有蛋白和/或功能蛋白獲得的。

5.人工脂蛋白在制備藥物載體或制備藥物中的應用；所述人工脂蛋白是通過在權利要求2所述脂肪體上招募一種或幾種載脂蛋白獲得的。

6.權利要求2所述脂肪體在檢測待測蛋白在脂滴上的結構、形態和密度中至少一種的應用。

7.權利要求2所述脂肪體的應用，為c1）至c3）中的任一種：

c1）評價待測蛋白和脂滴相互作用；

c2）檢測待測蛋白和脂滴的親和力；

c3）檢測ATGL酶活性。

8.權利要求2所述脂肪體在分析待測蛋白中氨基酸殘基的位置和/或種類對待測蛋白在脂滴的定位中的應用。

9.一種檢測待測蛋白和脂滴的親和力的方法，包括如下步驟：

d1）將不同濃度的待測蛋白和權利要求2所述脂肪體混合，孵育，然后檢測脂肪體上的蛋白質；

d2）完成步驟d1）后，以蛋白濃度為橫坐標，脂肪體結合蛋白濃度為縱坐標，繪制標準曲線；

d3）完成步驟d2）后，Scatchard分析計算待測蛋白和脂肪體的親和力，該親和力即為待測蛋白和脂滴的親和力。