[發明專利]一個新的甘油單-二酰酯脂肪酶

在審

• 申請號: 201911392389.8
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN113122520A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 趙強;徐正軍;牛其文
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發中心有限公司
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N15/55;C12P7/62
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔

本發明提供了一種具有脂肪酶活性的多肽，本發明提供的多肽包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：(a)如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，以及(b)由(a)所述的序列經過取代、缺失或添加至少一個氨基酸后得到的序列，其中由(b)獲得的多肽變體仍保持脂肪酶活性。本發明提供的多肽能水解和/或合成甘油單酯和/或甘油二酯。

發明領域

本申請屬于酶工程領域，具體地，涉及具有脂肪酶活性的多肽、其編碼核酸，以及包含所述編碼核酸的表達載體和宿主細胞。

發明背景

脂肪酶是酯酶的一種，可以催甘油三酯、甘油二酯、甘油單酯、其它小分子酯、多元醇酯和多元酸酯酯鍵的水解，脂肪為脂肪酶的天然底物，水解的過程中會產生甘油二酯和甘油單酯，水解最終產物為甘油和脂肪酸。脂肪酶水解條件溫和，副產物少，不需要輔酶。脂肪多為疏水物質，因此水解反應發生在油水界面或者有機相中。甘油單-二酰酯脂肪酶(MDGL)是脂肪酶的一種，MDGL具有底物特異性，僅作用于甘油單酰酯(MAG)和甘油二酰酯(DAG)，對甘油三酰酯(TAG)不起催化作用，可以利用酯化或轉酯化反應來生產具有較高工業價值的甘油單酰酯。

Yamaguchi等首先利用卡門柏干酪青霉獲得了MDGL，MDGL有2種形態，分子量分別為37KDa和39KDa，MDGL有26個氨基酸組成的信號肽，成熟肽包含279個氨基酸。Yamaguchi等以月桂酸乙烯酯為底物測定卡門柏干酪青霉來源的MDGL酶活單位，經培養基過濾、乙醇純化、硫酸銨沉淀、DEAE瓊脂糖凝膠過濾、纖維素膜純化和離子交換等純化步驟后，MDGL的比酶活為6680U/mg。MDGL由mdlA編碼，mdlA已經在畢赤酵母中獲得表達。

MAG是一種優良的乳化劑，在食品、醫藥和化妝品工業中有廣泛的應用。MAG的傳統合成工藝是在高溫下，以無機堿為催化劑，在氮氣條件下通過油脂/甘油三酯與甘油連續酯化進行生產，產物為MAG、DAG和TAG的混合物，通過蒸餾獲得MAG，MAG的產率為40-50％。與傳統合成工藝不同，酶法合成MAG是以脂肪酸和甘油為底物，在溫和條件下催化合成MAG，酶法催化中脂肪酸的轉化率超過97％，MAG在產物中的占比超過74％。目前限制酶法應用的主要問題是酶的活力較低和酶的成本較高。

因此，本領域亟需開發出活力較高的酶。

發明概述

本發明提供了一種具有脂肪酶活性的多肽。

本發明的多肽包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，以及

(b)由(a)所述的序列經過取代、缺失或添加至少一個氨基酸后得到的序列，

其中由(b)獲得的多肽變體仍保持脂肪酶活性。

在本發明的一個具體實施方案中，本發明的多肽包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。優選地，所述多肽由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列組成。

本發明的脂肪酶活性為甘油單-二酰酯脂肪酶活性。

本發明還提供了編碼本發明的多肽的多核苷酸，其包含選自以下的序列或由選自以下的序列組成：

(a)核苷酸序列，其編碼如權利要求1(a)或1(b)所述的氨基酸序列；以及

(b)在嚴格條件下與(a)中的核苷酸序列雜交的核苷酸序列。

在本發明的一個具體實施方案中，本發明提供的多核苷酸包含SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。在本發明的一個具體實施方案中，所述多核苷酸由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列組成。

本發明還提供了表達載體，其包含至少一種前述的多核苷酸。