[發明專利]非洲豬瘟病毒的檢測靶標以及熒光定量PCR檢測引物

在審

• 申請號: 201911389079.0
• 申請日: 2019-12-30
• 公開（公告）號: CN113122654A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 仇華吉;孫元;王濤;韓玉;羅玉子;李永鋒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所(中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;霍雪梅

本發明公開了非洲豬瘟病毒的檢測靶標以及熒光定量PCR檢測引物。本發明以ASFV中國流行毒株為對象，選擇多基因家族中相對保守又具研究和應用前景的MGF360?13L基因為靶標，建立了ASFV MGF360?13L TaqMan實時熒光定量PCR檢測方法。本發明方法可實現對最低15.6拷貝/μL ASFV核酸的檢測，與多種病原不存在交叉反應，相比常規PCR檢測方法，本發明檢測方法在敏感性上高出3個數量級。本發明所建立的檢測方法特異性強、靈敏度高、重復性好，與已有的經典檢測方法符合率高，能夠對可疑樣品進行二次確認，不僅豐富了ASFV現有檢測靶標，也能鑒別ASFV MGF基因趨勢疫苗毒與野毒感染。

技術領域

本發明涉及病毒的檢測靶標，尤其涉及非洲豬瘟病毒的檢測靶標、熒光定量PCR檢測引物以及由此建立的非洲豬瘟病毒MGF360-13L基因TaqMan熒光定量PCR檢測方法，屬于非洲豬瘟病毒的檢測或診斷領域。

背景技術

非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)感染豬引起的一種接觸傳染性、廣泛出血性、烈性傳染病，最急性和急性型感染死亡率可高達100％，是養豬業的頭號殺手。該病目前已呈現出跳躍式傳播，自2007年再次傳入歐洲后，迅速擴散至俄羅斯、烏克蘭、拉脫維亞、波蘭等十多個東歐國家。2018年8月傳入中國后，不到一年時間擴散至蒙古、朝鮮、以及越南、柬埔寨、老撾、緬甸韓國、泰國、東帝汶等多個亞洲國家。該病已呈現出全球流行趨勢，對全球養豬業的健康發展造成了重大威脅。截止目前，中國已累計爆發ASF疫情158起，撲殺豬只超過數百萬頭，保守估計造成直接經濟損失數百億元。由于無商品化疫苗可用，加之ASFV污染面積較廣，中國ASF的防控和根除形式異常嚴峻(王濤,孫元,羅玉子,仇華吉.非洲豬瘟防控及疫苗研發:挑戰與對策.生物工程學報,2018,34(12):1931-1942.DIXON L K,ISLAM M,NASH R,REIS A L.Africanswine fever virus evasion of host defences.Virus Research,2019,266:25-33.)。