[發(fā)明專利]一株防控腐爛莖線蟲的枯草芽孢桿菌ZWZ-19及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911387346.0
• 申請日: 2019-12-27
• 公開（公告）號: CN110878272B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王東;周洪友;張妞;孟煥文;趙遠征
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P5/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京慕達星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發(fā)明涉及一株用于防控腐爛莖線蟲的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ZWZ?19，屬于微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及的菌株ZWZ?19，已于2019年10月22日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為：CGMCC No.18718。室內(nèi)試驗表明，該菌株對腐爛莖線蟲具有良好的觸殺活性。田間試驗表明，利用ZWZ?19菌株發(fā)酵液進行馬鈴薯種薯拌種處理后，對腐爛莖線蟲病具有較好的防效，同時該菌株還具有一定的增產(chǎn)效果。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株防控腐爛莖線蟲的枯草芽孢桿菌ZWZ-19及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腐爛莖線蟲(Ditylenchus destructor)是世界上一種重要的植物病原線蟲，屬于遷移性植物內(nèi)寄生線蟲，是國際上重要的檢疫性線蟲。該線蟲寄主范圍較廣，包括70余種作物和雜草，也可以寄生在土壤真菌的菌絲上，主要寄主是馬鈴薯和甘薯，其他常見寄主有鳶尾、郁金香、大菖蒲、甜菜、三葉草、大麗菊、胡蘿卜、花生、向日葵、大豆、番茄、煙草、甘蔗、大麥、小麥等及多種野生植物，腐爛莖線蟲病是一種極難防治的土傳病害。近年來隨著我國馬鈴薯、甘薯面積的不斷擴大，腐爛莖線蟲的分布也越來越廣，主要發(fā)生在河北、河南、北京、山東、江蘇、安徽、吉林、內(nèi)蒙古等12個省(區(qū))，并成為北方甘薯產(chǎn)區(qū)最嚴重的病害；受害田塊一般可減產(chǎn)30％-50％，嚴重的可減產(chǎn)80％以上，甚至絕收。威脅著馬鈴薯、甘薯等相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，對地方經(jīng)濟產(chǎn)生了十分不利的影響。目前對于腐爛莖線蟲病的防治主要以化學防治為主，使用的大多數(shù)殺線劑嚴重污染環(huán)境，破壞生態(tài)平衡。近年來，隨著可持續(xù)農(nóng)業(yè)的快速發(fā)展，人們已將防治線蟲病害的工作重點轉(zhuǎn)向了生物防治。

植物線蟲病害的生防因子包括真菌、細菌、放線菌、病毒和原生動物等。Becker等(1988)報道了假單胞菌屬(Pseudomonas)和芽孢桿菌屬(Bacillus)對根結(jié)線蟲病害有防治作用。劉金輝等(2012)報道蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)菌株對甘薯莖線蟲具有高毒力。姚思敏(2018)報道巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)菌株D45發(fā)酵液及揮發(fā)性物質(zhì)對馬鈴薯腐爛莖線蟲具有殺線活性。因此，針對腐爛莖線蟲病害進一步篩選高活性的生防因子，并加快微生物殺線劑的研發(fā)與應(yīng)用，對于其有效防控意義重大。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明針對腐爛莖線蟲(Ditylenchus destructor)篩選生防因子，將微生物菌株常規(guī)液體發(fā)酵后，利用發(fā)酵液對線蟲進行處理，以評價其觸殺效果。

本發(fā)明篩選獲得的菌株ZWZ-19被鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所；保藏日期：2019年10月22日；保藏登記入冊的編號：CGMCC No.18718。

本發(fā)明的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19在室內(nèi)試驗中顯示對腐爛莖線蟲具有良好的觸殺效果，田間試驗表明該菌株對腐爛莖線蟲病有顯著的防治效果。

本發(fā)明的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19菌劑可以在馬鈴薯播種時拌種處理。

本發(fā)明的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)ZWZ-19菌株是通過平板活化后，再經(jīng)液體發(fā)酵制備，其具體方法如下：

1.平板活化

培養(yǎng)基配方為Luria-Bertani培養(yǎng)基(LB)：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCL5g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL。菌株接種于LB平板上，培養(yǎng)2d～3d。

2.液體發(fā)酵培養(yǎng)