[發(fā)明專利]一種提高融合細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911383451.7
• 申請(qǐng)日: 2019-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN110951722A
• 公開（公告）日: 2020-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙永祥;李大力;彭睿;程亮;鐘莉娉;何堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/07
• 分類號(hào): C12N15/07;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 張鋒

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種提高融合細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的方法，包括以下步驟：1）DC/B16融合細(xì)胞疫苗的制備；2）體外DC/B16融合細(xì)胞誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞向CD8ααTregs轉(zhuǎn)化；3）體外DAPT阻斷DC/腫瘤融合細(xì)胞疫苗刺激CD4+T細(xì)胞向CD8ααTregs轉(zhuǎn)化；4）DC/腫瘤融合細(xì)胞誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化的CD8ααTregs，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)，本發(fā)明的DC/腫瘤疫苗聯(lián)合DAPT為提高DC/腫瘤融合細(xì)胞疫苗在體內(nèi)的抗腫瘤生物活性提供一個(gè)新的有效方法，本DC/B16融合細(xì)胞疫苗，已經(jīng)在小鼠上試驗(yàn)成功，下一步可以在人體抗腫瘤臨床中試驗(yàn)應(yīng)用，為人類對(duì)抗腫瘤的臨床使用提供了一種很好的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種提高融合細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的方法。

背景技術(shù)

在危害人類健康的多種疾病中，腫瘤成為最主要的殺手。腫瘤（tumour）是指機(jī)體在各種致瘤因子作用下，局部組織細(xì)胞增生所形成的新生物（neogrowth），因?yàn)檫@種新生物多呈占位性塊狀突起，也稱贅生物（neoplasm）。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不同于正常細(xì)胞的代謝變化，同時(shí)腫瘤細(xì)胞自身可通過糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）之間的轉(zhuǎn)換來適應(yīng)代謝環(huán)境的改變。目前治療腫瘤的主要手段是手術(shù)、放射、化療等，但由于惡性腫瘤大多發(fā)生隱匿，侵襲性強(qiáng)、進(jìn)展快速、易轉(zhuǎn)移，一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移，不再具有手術(shù)治療的指征，而傳統(tǒng)的放療、化療法效果差，導(dǎo)致遠(yuǎn)期療效依然不甚理想，有待開發(fā)更為有效的治療策略。近年來，免疫治療逐漸成為腫瘤治療領(lǐng)域的新手段，其主要針對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，采用生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行干預(yù)和改善機(jī)體免疫能力，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。腫瘤免疫治療具有較強(qiáng)的特異性、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)，被認(rèn)為是腫瘤治療的希望所在。

目前，以DC為核心的腫瘤免疫治療是近年來研究熱點(diǎn)之一。DC即樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)因其表面具有星狀多形性或樹枝狀突起而得名,DC尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。DC起源自骨髓多能造血干細(xì)胞,分化主要有兩條途徑:①髓樣干細(xì)胞在 GM-CSF的刺激下分化為DC,稱為髓樣DC( myeloid dendritic cells,MDC),也稱DC1,與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞;②來源于淋巴樣干細(xì)胞,與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞,稱為淋巴樣DC( Lymphoid dendritic cells,LDC)或漿細(xì)胞樣DC(plasmacytoid dendritic cells,pDC),即DC2。DC是體內(nèi)抗原提呈能力最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，在天然免疫及獲得性免疫中扮演者重要角色，能顯著刺激初始型 T 淋巴細(xì)胞增殖。在腫瘤的發(fā)展過程中，DC捕獲腫瘤相關(guān)抗原（Tumor-associated antigens, TAAs），加工成抗原肽與MHC-I類分子和MHC-II類分子結(jié)合形成抗原肽-MHC分子復(fù)合物，遷移到次級(jí)淋巴器官。在次級(jí)淋巴器官，DC提呈抗原肽給天然CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞，激活和刺激這些細(xì)胞的分化，并啟動(dòng)TAA特異性T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。因此，DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗成為治療腫瘤研究的重點(diǎn)。許多抗腫瘤疫苗正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)中，包括由美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)了第一個(gè)DC疫苗治療轉(zhuǎn)移性前列腺癌。體外抗原負(fù)載DC是抗腫瘤免疫的第一步。負(fù)載抗原肽的方法包括：合成已知的TAA抗原肽、腫瘤裂解物、凋亡的腫瘤細(xì)胞、腫瘤RNA等等。但是，人們可獲得的已知抗原很少，大多數(shù)的腫瘤抗原是未知的。研究者們發(fā)現(xiàn)利用PEG法將DC與腫瘤細(xì)胞直接融合，相鄰細(xì)胞膜相互整合，胞質(zhì)相互流通，即能表達(dá)所有已知的和未知的腫瘤抗原，又能表達(dá)DC表面分子，從而更有效的刺激T細(xì)胞的增殖和活化。很多研究已證明了DC/腫瘤融合細(xì)胞疫苗能夠較好的活化CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用，但是臨床試驗(yàn)并不十分理想。這表明DC/腫瘤融合細(xì)胞疫苗的制備需要進(jìn)一步的改進(jìn)，暗示了可能存在破壞這些疫苗抗腫瘤的免疫機(jī)制。因此，如何研究一種能提高融合細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的方法，是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述存在的科學(xué)問題，提供提高融合細(xì)胞疫苗抗腫瘤效應(yīng)的方法。