[發明專利]一種補體H因子制備方法

有效

• 申請號: 201911381929.2
• 申請日: 2019-12-28
• 公開（公告）號: CN113045634B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 劉剛;張飛官;王凱;高玲;王強;蔣德席
• 申請（專利權）人: 四川遠大蜀陽藥業有限責任公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/30
• 代理公司: 深圳市韋恩肯知識產權代理有限公司 44375
• 代理人: 黃昌平

本發明公開了一種補體H因子制備方法，屬于血液制品領域。本發明公開的方法包括，以ATⅢ洗滌洗脫廢液為起始原料制備補體H因子。包括使ATⅢ洗滌洗脫廢液經過PEG沉淀富集H因子的步驟。本發明公開的技術方案中，PEG沉淀富集H因子的方法不影響后續層析步驟的試驗條件，并且通過PEG預先沉淀ATIII洗滌洗脫廢液可以去除一部分雜蛋白，因此可以獲得純度更高、穩定性更高的H因子。

技術領域

本發明涉及血液制品技術領域，具體涉及一種補體H因子制備方法。

背景技術

H因子(又稱補體H因子，因子H)，是一個多結構和多功能的單鏈蛋白，分子量150kD，是H因子蛋白家族中最具特征性的一員，由20個獨立的能折疊的結構域(shortconsensus?repeats,SCRs)組成，而每個SCR由大約60個氨基酸組成，形成球狀結構，含有四個保守的半胱氨酸殘基(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)，在Ⅰ～Ⅲ和Ⅱ～Ⅳ間形成二硫鍵。

H因子作為補體系統的負調控因子之一，在早期的補體活化過程中起重要的調控作用。有研究表明，H因子一方面可作為I因子的共軛輔助因子促進C3b的降解(Complementfactor?I:a?susceptibility?gene?for?atypical?haemolytic?uraemicsyndrome.Journal?of?Medical?Genetics(2004).41(6):e84)；而另一方面可競爭性同Bb結合至C3b上，抑制C3轉化酶(C3bBb)的生成，進而負調控補體系統的活化(Functionaldomains,structural?variations?and?pathogen?interactions?of?MCP,DAF?andCR1.Atkinson.2000,49:103-116.)。除此之外，H因子包含多個結合位點的特性決定了它具有補體調控因子之外的功能，如可以作為黏附蛋白,成為細胞整合素受體CR3(CD11b/CD18)的配體，顯示趨化活性(補體H因子研究進展,Foreign?Medical?Sciences?Section?ofPediatrics.2005.32(3))。

目前的研究揭示，H因子的缺陷與多種疾病的發生以及進程顯著相關，比如溶血尿毒綜合征(HUS)、膜增殖性腎小球腎炎(MPGN)和年齡相關性黃斑變性(ARMD)等疾病。對由于基因缺陷造成H因子減少或缺失如果施用功能性H因子可能對治療疾病有幫助，例如：WO2014206414A1公開了H因子還可用于預防或治療骨丟失和促進間充質細胞分化為成骨細胞；US?9248162公開了H因子還可用于預防或抑制同種異體移植物接受者的同種異體移植物排斥；KR?1020150058836A公開了H因子可用于預防或治療含有替代途徑抑制劑的腎病。盡管臨床上對H因子治療藥物需求迫切，但是迄今為止尚未有H因子及其類似物的藥物上市。

血漿來源的H因子或包含其的藥物組合物被認為可以用作患有H因子缺陷相關疾病的患者的治療藥物；同時人血漿因為含有豐富的H因子常被來制備商業化H因子或H因子組合物。血源補體H因子純化起始原料通常選自血液或血漿及它們的衍生部分。從血漿及它們的衍生部分分離純化H因子的工藝陸續被公開，比如US10183976公開了一種從血漿乙醇沉淀組分Ⅰ上清中用乙醇沉淀并富集H因子的方法。US20140275496A1公開了一種從血漿乙醇沉淀組分Ⅰ沉淀中提取并用PEG沉淀的方法富集H因子的方法。US?9109044公開了一種從血漿乙醇沉淀組分沉淀物和/或級分II+III沉淀物中提取并用乙醇沉淀的方法富集H因子的工藝。CN?103153333B公開了一種從血液或血漿辛酸沉淀中純化H因子的方法。這些方法都有一個共同的特點：改變現有血液制品比如靜丙或人血白蛋白的生產工藝，開發適宜H因子生產的工藝路線，這勢必對靜丙或人血白蛋白的質量或者產率產生影響，進而影響噸血漿收益。血制品企業無動機犧牲高經濟價值的靜丙或人血白蛋白的收益轉而開發H因子，因此現有技術公開的H因子工藝擴大到生產規模較困難。因此，在不顯著改變現有血液制品制備工藝的情況下，開發規?；苽銱因子的工藝具有重要意義。

發明內容

本發明提供一種從ATⅢ洗滌洗脫廢液中制備補體H因子的方法。