[發明專利]一種維生素B12

有效

• 申請號: 201911365295.1
• 申請日: 2019-12-26
• 公開（公告）號: CN111073922B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 盧正東;陳情;雷華;夏煒鎧;肖其磊
• 申請（專利權）人: 湖北廣濟藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P19/42
• 分類號: C12P19/42;C12N1/20;C12R1/38
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 劉榮

本發明涉及生物制藥技術領域，特別是涉及一種B₁₂發酵補料培養基及補料方法，提供可維持發酵中后期菌體生長繁殖并持續合成維生素B₁₂的發酵補料培養基及補料方法。通過在不同發酵階段進不同的補料，在不同階段將總糖、甜菜堿、溶氧量、甘氨酸控制到到最適宜的含量，平衡發酵中后期菌體生和代謝關系，充分改善菌體老化發空現象，提高發酵單位；解除底物抑制、產物反饋抑制和分解代謝物的阻遏；避免一次投料過多造成細胞大量生長所引起的一切影響，改善發酵液流變學性質。

技術領域

本發明涉及生物制藥技術領域，特別是涉及B₁₂發酵補料培養基及補料方法。

背景技術

維生素B₁₂又叫鈷胺素，是唯一含金屬元素的維生素。維生素B₁₂是以脫氮假單孢菌為發酵菌株，發酵生產出來的一類維生素。維生素B₁₂主要生理功能是參與制造骨髓紅細胞，防止惡性貧血；防止大腦神經受到破壞。是神經系統功能健全不可缺少的維生素。

現有技術中，以脫氮假孢菌做出發菌株發酵過程中，需要補入甜菜堿。甜菜堿能促進細胞表面分泌代謝產物以刺激細菌產生維生素B₁₂。此外，甜菜堿是維生素B12生產過程中的甲基供體，同時甜菜堿脫甲基后形成的甘氨酸作為氮源參與了菌體的生長代謝。

但是維生素B₁₂是一種初級代謝產物，它跟菌體的生長密切相關，高濃度甜菜堿會抑制菌體生長，不利于維生素B₁₂的合成。因此，在脫氮假單胞菌發酵產維生素B12的過程中，一般采用分次補加工藝，以維持甜菜堿濃度又不致過大而對菌體生長產生負面影響。這種方式在菌體生長代謝旺盛的階段可達到較好的效果，但是在130小時后的發酵中后期階段，隨著菌體的生長代謝減弱，菌體對甜菜堿的分解代謝減弱，甘氨酸和甲基的供給也隨之減弱，這又進一步影響到菌體的生長和維生素B₁₂的合成。

因此在菌體生長后期如何在保證菌體生長不受抑制的情況下，又能保證甘氨酸和甲基的供應對菌體的生長和維生素B₁₂的合成十分重要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可維持發酵中后期菌體生長繁殖并持續合成維生素B₁₂的補料方法。同時平衡發酵中后期菌體生和代謝關系，充分改善菌體老化發空現象，提高發酵單位。

本發明的技術方案為一種維生素B₁₂發酵補料培養基補料方法，所述維生素B₁₂發酵補料培養基用于以脫氮假單孢菌為生產菌種發酵生產維生素B₁₂的發酵過程中，包括以下步驟：

步驟1：在發酵25-35小時，當總糖含量低于5.0％時補入補料A，所述補料A至少包括葡萄糖；

步驟2：在發酵35小時后，當甜菜堿含量低于0.5％時補入補料B，所述補料B至少包括甜菜堿；

步驟3：從步驟1開始補入補料A到發酵70小時，控制總糖含量在4％-5％，發酵70小時后控制總糖含量3.0％-4.0％至放罐；

步驟4：從步驟2開始補入補料B到發酵至130-150小時，控制甜菜堿含量在3％-5％，發酵130-150小時后不再補加甜菜堿；

步驟5：在發酵過程的前20小時，將發酵液溶氧量控制在15％-25％，在發酵過程的20小時后，將發酵液溶氧量控制在5％-15％；

步驟6：從發酵到發酵至130-150小時，補加補料C，所述補料C至少包括甘氨酸和氯化膽堿，控制甘氨酸含量在0.2-0.5％。

而且，補料A為葡萄糖300-600g/L，氯化鈷0.3-0.7g/L，5-6二甲基苯并咪唑0.3-0.7g/L，消泡劑0.2-0.5g/L。