[發明專利]一種薄殼山核桃的微體嫁接方法

有效

• 申請號: 201911346972.5
• 申請日: 2019-12-24
• 公開（公告）號: CN110810251B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 譚鵬鵬;彭方仁;張潔;梁有旺;朱凱凱;周穎
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G2/30;A01G31/00;A01G24/10;A01G24/15;A01G24/28
• 代理公司: 南京業騰知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 李靜

1.一種薄殼山核桃的微體嫁接方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）接穗的準備

在薄殼山核桃優良品種中，選取三年生嫁接苗帶腋芽的莖段作為外植體，清洗后用70-75v%的乙醇溶液浸泡20-30s，無菌水沖洗后用0.05-0.1wt%的 HgCl₂溶液消毒處理10-15min，然后用無菌水沖洗，切成1cm長的莖段，接入腋芽誘導培養基進行培養，培養15-20d后，將產生的腋芽轉入繼代培養基進行培養，得到無根試管苗，選取無污染、無褐化現象，莖長2~4cm、帶有葉片的、生長狀況良好的無根試管苗作為接穗；

（2）砧木的培育

取成熟薄殼山核桃種子，用自來水沖洗后浸泡3 d，然后在無菌室內用70-75v%的乙醇溶液浸泡20-30s，無菌水沖洗后用0.05-0.1wt%的 HgCl₂溶液消毒處理10-15min，用無菌水沖洗后置于超凈工作臺上剝去果殼，剝取種仁放入0.1%HgCl₂溶液中進行消毒，從消毒過的種仁中切取種胚，將其豎直插入種胚誘導培養基，在21-25℃、空氣相對濕度保持為70-80%、全黑暗的條件下進行培養，培養25-30d后，得到組培苗，作為砧木苗；

（3）微體嫁接

將砧木苗放于日光燈下煉苗5-10d，待淺紅色嫩莖變成青綠色、頂部葉片展開時進行嫁接，先將砧木苗取出，切除胚芽的上部，保留胚軸以上2cm的部分作為砧木，在橫切面的中央垂直下切，劈開砧木，切口深0.5-1cm，將接穗下端兩側對稱切削，成一楔形，切口長0.5-1cm，然后將接穗插入砧木切口中，用保鮮膜包扎，即完成嫁接；嫁接后，將嫁接苗移至嫁接苗培養基上培養，待嫁接苗培養25d后解綁，開蓋煉苗一周后移栽到栽培基質中；

步驟（1）中，腋芽誘導培養基的配方為：MS+2.0mg/L 6-BA +0.02mg/L IBA +30g/L 蔗糖+5.8g/L瓊脂，pH值為5.8-6.0；

步驟（1）中，所述繼代培養基配方為：改良DKW+1.0mg/L 6-BA+0.01mg/L IBA+5.8g/L瓊脂+30 g/L蔗糖+0.1-1.0g/L抗褐化劑，pH5.8-6.0，抗褐化劑選自活性炭、聚乙烯吡咯烷酮或維生素C中任意一種；

步驟（2）中，種胚誘導培養基配方：改良DKW+2mg/L KT +1mg/L 6-BA +0.01mg/L IBA ，pH值為5.70-5.85；

所述改良DKW的配方為（mg/L)：硝酸銨1416.0，硼酸4.8，無水氯化鈣112.5，硝酸鈣1367.0，五水硫酸銅0.25，Na₂-EDTA 45.4，七水硫酸鐵 33.8，硫酸鎂 361.49，一水硫酸錳33.5，鉬酸鈉 0.39，六水硫酸鎳 0.005，磷酸二氫鉀 265.0，硫酸鉀 1559.0，六水硝酸鋅17.0，鹽酸硫胺素 5.22，肌醇100，煙酸1.0；

步驟（3）中，所述嫁接苗培養基配方為：MS+6-BA 1mg/L+IAA 3.0mg/L，pH值為5.70-5.85。

2.如權利要求1所述薄殼山核桃的微體嫁接方法，其特征在于，步驟（1）中，采用0.1wt%的HgCl₂溶液消毒處理10min。

3.如權利要求1所述薄殼山核桃的微體嫁接方法，其特征在于，步驟（1）中，培養條件為：溫度25℃±2℃，光照強度2400~2600lx，日光燈作為光源，光照時間14h/d，空氣相對濕度為70-80%。

4.如權利要求1至3任一項所述薄殼山核桃的微體嫁接方法，其特征在于，步驟（3）中，所述栽培基質為河沙、重量比為1:1的珍珠巖與蛭石的混合物或重量比為1:1:1的珍珠巖、蛭石和腐殖土的混合物中的任意一種。