[發明專利]絲狀噬菌體pⅧ蛋白單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201911340110.1
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN113087789B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 王戰輝;于雪芝;溫凱;沈建忠;楊慧娟;袁婷;郭柳川;張素霞;史為民
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C07K14/01;C07K14/765;C07K14/795;C12N15/11;C12N5/20;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及生物醫學技術領域，具體涉及絲狀噬菌體pⅧ蛋白單克隆抗體及其應用。本發明提供的絲狀噬菌體pⅧ蛋白單克隆抗體的重鏈可變區具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，輕鏈可變區具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；或者，重鏈可變區具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，輕鏈可變區具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。本發明提供的單克隆抗體具有生物活性單一、效價高、特異性高的優點，能夠高效、特異地結合和識別絲狀噬菌體，在絲狀噬菌體識別和噬菌體展示技術中具有重要的應用價值。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，具體涉及絲狀噬菌體pVIII蛋白單克隆抗體及其應用。

背景技術

噬菌體展示技術是由George Smith于1985年建立的基因表達篩選技術，該技術通過將外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌體外殼蛋白結構基因的適當位置，使外源基因隨外殼蛋白的表達而表達，同時，外源蛋白隨噬菌體的重新組裝而展示到噬菌體表面。噬菌體展示技術可將重組蛋白質篩選和基因篩選合二為一，已經作為一種強大的工具運用在抗體和酶的配體篩選、小分子的受體篩選、基因工程抗體篩選等各個領域。該技術獲得了2018年諾貝爾化學獎，主要研究成果涉及對蛋白質演化進行控制，開發特異性蛋白質代替傳統方法生產藥物、化學品，獲得了催化化學反應的定制酶、定向進化的人類抗體藥物。諾貝爾化學獎得主發明的方法可利用遺傳變異和篩選，開發出人類需要的蛋白質，以推動更為綠色的化學工業，幫助開發新型材料，制造可持續的生物燃料，幫助減輕人類疾病或挽救生命，因此噬菌體展示技術具有極高的應用價值。

利用噬菌體展示技術篩選特異性蛋白，首先要建立噬菌體展示文庫，以展示不同外源基因，然后再對噬菌體文庫進行篩選。構建文庫獲得外源基因片段的方法有：人工合成、cDNA法、脫氧核糖核酸酶I(DNase I)水解DNA等。將外源片段連入噬菌粒中，將重組噬菌粒轉入到宿主細胞內，再加入M13KO7輔助噬菌體進行超感染培養，收集培養液上清，上清即為噬菌體展示文庫。在此過程中，輔助噬菌體作用是為噬菌粒DNA提供復制和包裝所需要的酶和外殼蛋白。

在噬菌體展示庫篩選過程中，需要對外源多肽的特異性進行鑒定，目前主要是通過抗M13KO7輔助噬菌體抗體來進行識別和信號呈遞，以此來區分陰性和陽性克隆。具有效價高，特異性強，穩定性好的抗體等對結果的判定起著至關重要的作用，直接影響著噬菌體展示技術的效率和成功率。目前，國內尚沒有可以應用于識別絲狀噬菌體的單克隆抗體的報道。pVIII蛋白是噬菌體的主要衣殼蛋白，多達2700個拷貝(相比于其他低拷貝數的衣殼蛋白在數量上具有明顯的優勢)。因此，制備高特異性的pVIII 蛋白單克隆抗體對噬菌體的識別和噬菌體展示技術具有重要意義。

發明內容

為解決現有技術存在的技術問題，本發明的目的在于提供具有高特異性、高親和力和高效價的絲狀噬菌體pVIII蛋白單克隆抗體以及該單克隆抗體的應用。

為實現上述目的，本發明分別利用絲狀噬菌體pVIII衣殼蛋白膜外多肽部分偶聯載體蛋白制備的免疫原和絲狀噬菌體免疫小鼠，對免疫小鼠進行血清效價和特異性的精確篩選，通過細胞融合獲得能夠穩定、高效分泌絲狀噬菌體pVIII蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞以及具有高特異性和高親和力的絲狀噬菌體pVIII蛋白單克隆抗體。

具體地，本發明的技術方案如下：

第一方面，本發明提供絲狀噬菌體pVIII蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體包含重鏈可變區和輕鏈可變區，能夠特異性結合絲狀噬菌體pVIII蛋白；所述重鏈可變區具有如下氨基酸序列中的任一種：

(1)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示；

(2)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列經一個或多個氨基酸的缺失、替換或插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；