[發(fā)明專利]一種原代細(xì)胞培養(yǎng)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911337507.5
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN110923194B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃誠坤;鐘國亮;勞海金
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東依浦賽生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭;肖宇揚

本發(fā)明提供一種原代細(xì)胞培養(yǎng)的方法，所采用的試劑種類包括：培養(yǎng)液A、胎牛血清、GlutaMAX^TM補充液、青霉素?鏈霉素?新霉素溶液、EGF、bFGF、膠原酶IV、DNA酶I、青霉素?鏈霉素?兩性霉素B混合溶液；培養(yǎng)液A中添加有無機鹽、氨基酸和維生素。利用本發(fā)明提供的用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的試劑盒中提供的試劑，能夠配制用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的過程中用于剪碎組織樣本、消化組織樣本以及實現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)增殖的所需溶液，所配得的溶液中的酶水平、微量元素水平、氨基酸水平、維生素水平都能夠適應(yīng)性地滿足原代細(xì)胞各個培養(yǎng)階段的營養(yǎng)需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地，涉及一種原代細(xì)胞培養(yǎng)的方法。

背景技術(shù)

原代培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，指直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的首次培養(yǎng)，較為嚴(yán)格地說，原代培養(yǎng)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

原代培養(yǎng)的細(xì)胞因為組織剛剛離體，其生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保留原二倍體遺傳性，基因保留量在90％以上，適用于藥物敏感性試驗及機制探究相關(guān)試驗，其數(shù)據(jù)更具有說服力，同時通過原代培養(yǎng)技術(shù)建立相應(yīng)病變細(xì)胞系或株，研究其病變、分子遺傳以及轉(zhuǎn)移演變機制等，對多種疾病研究與治療起著舉足輕重的作用。原代細(xì)胞作為分子生物學(xué)研究中的重要工具細(xì)胞，隨著生物科學(xué)研究的急速發(fā)展，原代細(xì)胞在生物學(xué)實驗中使用越來越廣泛，與之相適應(yīng)，原代細(xì)胞的需求量也呈現(xiàn)持續(xù)增長的趨勢。因此，有必要發(fā)展能夠快速培養(yǎng)原大量代細(xì)胞的方法以適應(yīng)當(dāng)今的科學(xué)發(fā)展需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種原代細(xì)胞培養(yǎng)的方法，以快速地獲取大量的原代細(xì)胞。

根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供一種用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的試劑盒，包括：培養(yǎng)液A、胎牛血清、GlutaMAX^TM補充液、青霉素-鏈霉素-新霉素溶液、EGF、bFGF、膠原酶IV、DNA酶I、青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液；培養(yǎng)液A中添加有無機鹽、氨基酸和維生素；無機鹽包括氯化鈣、硫酸銅、硝酸鐵、硫酸亞鐵、硫酸鎂、氯化鉀、碳酸氫鈉、氯化鈉、磷酸一鈉，磷酸二鈉、硫酸鋅中的至少一種；氨基酸包括L-丙氨酸、L-精氨酸鹽酸鹽、L-天門冬酰胺一水物、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸鹽酸鹽一水物、L-胱氨酸二鹽酸鹽、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、甘氨酸、L-組氨酸鹽酸鹽一水物、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸鹽酸鹽、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸二鈉鹽二水物、L-纈氨酸中的至少一種；維生素包括維生素H、氯化膽堿、葉酸、肌醇、煙酰胺、維生素B5、維生素B6、維生素B2、維生素B1、維生素B12中的至少一種。

本發(fā)明人經(jīng)過多次改進(jìn)和嘗試，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)于含有EGF或bFGF的培養(yǎng)基質(zhì)中的原代細(xì)胞表現(xiàn)出優(yōu)異的增殖潛能，本發(fā)明提供的用于原代細(xì)胞培養(yǎng)的試劑盒中提供了包括EGF、bFGF在內(nèi)的試劑組，利用所提供的試劑組進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)，能夠在短時間內(nèi)高效地培養(yǎng)得到大量的原代細(xì)胞。

優(yōu)選地，無機鹽包括的種類及其對應(yīng)的在培養(yǎng)液A中的濃度如下：氯化鈣0.1–0.15g/L，硫酸銅0.5–1μg/L，硝酸鐵10–80μg/L，硫酸亞鐵0.2–0.5mg/L，硫酸鎂0.05–1g/L，氯化鉀0.2–0.5g/L，碳酸氫鈉1–1.5g/L，氯化鈉5–10g/L，磷酸一鈉0.05–0.1g/L，磷酸二鈉0.05–0.1g/L，硫酸鋅0.3–0.7mg/L。