[發(fā)明專利]腫瘤相關(guān)基因c-kit突變相關(guān)抗原短肽及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911336736.5
• 申請日: 2019-12-23
• 公開（公告）號: CN111116734A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李許鋒;黃燕花;趙乙木;羅夫·辛克納吉;孫晨
• 申請（專利權(quán)）人: 維塔恩（廣州）醫(yī)藥有限公司
• 主分類號: C07K14/71
• 分類號: C07K14/71;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00;A61P37/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

本發(fā)明公開了c?kit突變相關(guān)抗原短肽及其應(yīng)用。所述c?kit突變相關(guān)抗原短肽的序列如SEQ ID NO:1?20任一所示。該短肽具有與DC細胞上MHC I分子高度的親和力，并能有效地刺激、誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)，可用于c?kit基因突變細胞的免疫清除，進而預(yù)防c?kit基因突變相關(guān)疾病的發(fā)生，尤其是c?kit基因突變相關(guān)腫瘤疾病的預(yù)防；因此本發(fā)明的c?kit抗原短肽具備良好的多肽疫苗及DC疫苗的潛力，具有良好的臨床轉(zhuǎn)化及疾病預(yù)防潛力。而且，本發(fā)明的c?kit抗原短肽長度較短，化學(xué)合成難度小，可以直接合成得到高純的產(chǎn)物，應(yīng)用成本大大降低，同時效果明確，具有很好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及腫瘤相關(guān)基因c-kit突變相關(guān)抗原短肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

c-kit原癌基因定位于人染色體4號長臂1區(qū)2和3帶(4q12-13)，其產(chǎn)物是Ⅲ型酪氨酸激酶生長因子受體，編碼145kD的跨膜糖蛋白酪氨酸激酶受體。c-kit基因具有21個外顯子，正常情況下c-kit的活化依賴配體干細胞因子(stem cell factor，SCF)的觸發(fā)，使底物蛋白磷酸化激發(fā)信號傳導(dǎo)通路，最終激發(fā)重要的細胞功能，如增生、凋亡等，而突變后的c-kit基因可以不依賴配體而自動磷酸化，細胞增生不可控，最終可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。有研究者指出c-kit的基因功能獲得性突變(gain-of-function mutation)可能是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的核心事件。因此，維持c-kit的正常對維持細胞的正常功能和預(yù)防相關(guān)癌癥等疾病非常重要。

利用腫瘤相關(guān)抗原短肽誘導(dǎo)建立腫瘤抗原肽特異性CTL，從而獲得具有特異性殺傷腫瘤細胞的CTL克隆，被激活的CTL可以殺死相應(yīng)的靶細胞，發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。而該技術(shù)的關(guān)鍵前提是獲得免疫原性、特異性好、能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細胞毒性T淋巴細胞的相關(guān)抗原短肽。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在針對腫瘤相關(guān)基因c-kit開發(fā)c-kit基因突變相關(guān)抗原短肽，所述c-kit基因突變相關(guān)抗原短肽具有與DC細胞上MHC I分子高度的親和力，并能有效地刺激、誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)，可用于c-kit基因突變細胞的免疫清除，具備良好的多肽疫苗及DC疫苗的潛力。

本發(fā)明的目的是提供腫瘤相關(guān)基因c-kit突變相關(guān)抗原短肽。

本發(fā)明另一目的是提供該短肽在制備用于c-kit突變的DC疫苗中的應(yīng)用。

本發(fā)明再一目的是提供一種用于c-kit突變的DC疫苗。

本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

本發(fā)明人通過T細胞表位預(yù)測綜合平臺NetCTL數(shù)據(jù)庫(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetCTL)在線分析，通過生物信息學(xué)預(yù)測，發(fā)現(xiàn)COSM1290、COSM1311、COSM1310、COSM1314的突變多肽能夠與MHC-I類分子結(jié)合(c-kit的這幾個突變位點在肺癌、惡性黑色素瘤、腸癌等實體瘤中檢出)。說明該位點是免疫清除C-KIT基因突變細胞的重要靶點。而免疫學(xué)研究證實，CD8陽性T淋巴細胞CTL發(fā)揮細胞免疫的原理為：CTL細胞通過識別與MHC-I分子結(jié)合的抗原肽被激活，被激活的CTL可以殺死相應(yīng)的靶細胞，發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。因此，本發(fā)明通過生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測c-kit突變序列與T淋巴細胞受體(TCR)及MHC I類分子的結(jié)合能力，同時分析其表達定位于細胞膜外，設(shè)計優(yōu)化了針對腫瘤相關(guān)基因c-kit突變相關(guān)抗原短肽，本發(fā)明篩選得到的c-kit抗原短肽，其多肽序列優(yōu)選為SEQ ID NO:1-20任一所示，所得c-kit抗原短肽具有與DC細胞上MHC I分子高度的親和力并能有效地刺激、誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTLs)，抑制腫瘤細胞生長，說明其具備良好的多肽疫苗及DC疫苗的潛力，具有良好的臨床轉(zhuǎn)化及疾病預(yù)防前景。

因此，以下產(chǎn)品及應(yīng)用均應(yīng)在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)：