[發明專利]一種太瑞斯梭孢殼霉磷脂酶C及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201911316108.0
• 申請日: 2019-12-19
• 公開（公告）號: CN113005110B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 楊紹青;江正強;相曼;閆巧娟;王靈
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N15/55;C12P13/00;C11B3/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 秦夢楠

本發明公開了一種太瑞斯梭孢殼霉磷脂酶C及其編碼基因與應用。將本發明太瑞斯梭孢殼霉磷脂酶C編碼基因導入畢赤酵母中進行異源表達，重組巴斯德畢赤酵母在5L發酵罐中高密度發酵，酶活力可達98970U/mL，蛋白質含量為4.9mg/mL，實現了高效表達。該磷脂酶C的最適pH為6.5，在pH 4.5?8.0保持穩定；最適溫度為55℃，在45℃以下較好的穩定性。該磷脂酶C應用于大豆毛油脫膠，脫膠油滿足工業植物油脫膠要求。所述磷脂酶C在食品工業中具有良好的應用潛力。

技術領域

本發明涉及食品生物技術領域，具體涉及一種太瑞斯梭孢殼霉磷脂酶C及其編碼基因與應用。

背景技術

磷脂酶C(phospholipase C，EC 3.1.4.3)是一種專一作用于甘油磷脂C₃位上甘油磷酸酯鍵的酯類水解酶，生成同為油脂成分的甘油二酯(DAG)及磷脂化合物(Vines CM.Phospholipase C.Advances in experimental medicine and biology,2012,740:235-254)。磷脂酶C因其在食品、藥品、保健品、化妝品等工業領域具有巨大的應用前景而受到廣泛關注。在食品工業中，磷脂酶C可以用來改善面包的冷凍保存時間、避免生面團烤制時面包表面的老化，以及減少面包表面梨皮狀表皮等。應用于油脂精煉過程，不僅能減少油脂中磷脂含量，還能提高精煉油得率(余榛榛,常明,劉睿杰等. 單增李斯特氏菌磷脂酶C(lm-plcB)基因的克隆表達及其在油脂脫膠中的應用.食品與發酵工業,2013,39(12):44-49)。

磷脂酶C的來源廣泛，存在于動物、植物和微生物中(Cocco L,Follo M Y,ManzoliL.Phosphoinositide-specific phospholipase C in health and disease.Journal oflipid research,2015,56:1853-1860)。相較于動植物來源的磷脂酶C，微生物來源的磷脂酶C 容易培養、純化和提取，具備更大的應用潛力(劉菲菲,張梁,顧正華等.蠟狀芽孢桿菌磷脂酶C基因在大腸桿菌中的異源表達.食品科學,2013,34(11):182-187；任龍,楊寧,陳福生等.蠟樣芽胞桿菌深圳株754-1 PLC基因的克隆及表達.武漢工業學院學報, 2007,02:19-21+35)。目前，已從多種不同來源微生物中分離純化出磷脂酶C，包括梭菌屬(Diner BA.Purification and properties of Clostridium welchii phospholipase C.Biochimica etbiophysica acta,1970,198:514-)、芽孢桿菌屬(Levine L,Xiao D M,Little C.Increased arachidonic acid metabolites from cells in culture aftertreatment with the phosphatidylcholine-hydrolyzing phospholipase C fromBacillus cereus.Prostaglandins, 1998,34:633–642)、假單胞菌屬(Mo S,Kim J H,ChoK W.A novel extracellular phospholipase C purified from a marine bacterium,Pseudoalteromonas sp.J937. Biotechnology letter,2009,31:89-94)、鏈霉菌屬(Iwasaki Y,Niwa S,Nakano H,et al. Purification and properties ofphosphatidylinositol-specific phospholipase C from Streptomycesantibioticus.Biochimica biophysica acta–lipids and lipid metabolism,1994,1214:221-228)、不動桿菌屬(Lehmann V.Production ofphospholipase CinAcinetobacter calcoacetius.Acta pathologica et microbiologica scandinavicasection a-pathology,1971,79: 789-)等。但是由于天然微生物磷脂酶C產量低，工業化應用價值不能很好地體現。 (趙金星,張梁,顧正華等.大腸桿菌重組表達磷脂酶C的發酵工藝優化.食品科學, 2013,34(9):143-149)。