[發(fā)明專利]一種分離測(cè)定氟比洛芬酯中2種基因毒性雜質(zhì)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911315600.6
• 申請(qǐng)日: 2019-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN113008999A
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪;郭云程;劉強(qiáng);陳佳江;鐘家慶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶藥友制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/54
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本發(fā)明公開了一種分離測(cè)定氟比洛芬酯中基因毒性雜質(zhì)乙酸乙烯酯和苯的方法。該方法采用液相色譜法，以十八烷基硅膠色譜柱為固定相，以乙腈?磷酸水為流動(dòng)相，可以將乙酸乙烯酯和苯有效分離，各雜質(zhì)峰形較好，柱效較高，專屬性好，良好地控制氟比洛芬酯的質(zhì)量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及氟比洛芬酯中2種基因毒性雜質(zhì)的分析方法。

背景技術(shù)

氟比洛芬酯（以下簡(jiǎn)稱“FLUR”），是氟比洛芬的前藥，可以抑制環(huán)氧化酶（COX-1和COX-2），從生理上減少前列腺素（PGs）的合成，達(dá)到解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用。

根據(jù)ICH M7，本發(fā)明人開展了對(duì)氟比洛芬酯的基因毒性雜質(zhì)研究。發(fā)現(xiàn)氟比洛芬酯有關(guān)物質(zhì)種類較多，雜質(zhì)數(shù)量也相當(dāng)多且復(fù)雜，具體研究?jī)?nèi)容如下：

首先，氟比洛芬酯基因毒性雜質(zhì)譜分析見下表1。分為芳香胺類、亞硝基化合物、邁克爾加成反應(yīng)受體、醛類、烷烴鹵代物和苯等類別，共6種類型的化合物。

表 氟比洛芬酯基因毒性雜質(zhì)譜匯總表

。

其次，根據(jù)不同類別的雜質(zhì)化合物的特點(diǎn)，展開相應(yīng)的方法學(xué)研究，各方法匯總見下表2。

表2氟比洛芬酯基因毒性雜質(zhì)分析方法匯總表

。

需要說明的是，在方法學(xué)研究過程中，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)采用現(xiàn)有技術(shù)和常規(guī)的GC的方法難以將乙酸乙烯酯和苯很好的分離。乙酸乙烯酯和苯屬于不同結(jié)構(gòu)類別的化合物，但確實(shí)很難將它們分離測(cè)定。如采用胡婧等（丙烯酸酯壓敏膠中殘留單體的HPLC法測(cè)定，中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2010, 41(2) ：120-122）建立的同時(shí)測(cè)定丙烯酸酯壓敏膠中三種殘留單體——乙酸乙烯酯、丙烯乙烯酯和丙烯酸正丁酯的含量的HPLC法，其流動(dòng)相為乙腈-水（40:60），等度或者梯度均不能將氟比洛芬酯中2個(gè)基因毒性雜質(zhì)有效的分離。又如乙酸乙烯酯和苯這兩個(gè)化合物各自常規(guī)分析方法都是GC-FID方法，然而采用常規(guī)GC-FID的測(cè)定方法也難以將這兩個(gè)雜質(zhì)分離檢測(cè)，不能達(dá)到很好的檢測(cè)靈敏度、方法重復(fù)性和精密度。

為了有效控制和保證氟比洛芬酯的質(zhì)量，確保其基因毒性雜質(zhì)的有效控制， 有必要研究一種靈敏度高、重復(fù)性好及精密度佳的有效分離乙酸乙烯酯和苯這兩個(gè)雜質(zhì)的測(cè)定方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)氟比洛芬酯中對(duì)乙酸乙烯酯和苯的有效控制，本發(fā)明人經(jīng)過大量反復(fù)的研究，最終開發(fā)出一種HPLC-UV的檢測(cè)方法，該方法對(duì)氟比洛芬酯原料藥和制劑的質(zhì)量控制具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種分離測(cè)定氟比洛芬酯中基因毒性雜質(zhì)的方法，該方法能對(duì)氟比洛芬酯中的乙酸乙烯酯和苯進(jìn)行有效的分離檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)氟比洛芬酯的原料藥的質(zhì)量控制和保證氟比洛芬酯注射液的質(zhì)量。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，提供如下實(shí)施方案。

在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種分離測(cè)定氟比洛芬酯中基因毒性雜質(zhì)的方法，所述雜質(zhì)為乙酸乙烯酯和苯，該方法為液相色譜法，包括：1）色譜柱為十八烷基硅膠鍵合的色譜柱，2）流動(dòng)相由流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成，其中，流動(dòng)相A為磷酸水，流動(dòng)相B為乙腈，3）流動(dòng)相中乙腈與磷酸水的體積比為：乙腈為10%~90%，磷酸水為10%~90%。

上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，磷酸水（流動(dòng)相A）-乙腈（流動(dòng)相B）的體積比為10:90~90:10，所述磷酸水，其磷酸含量為0.05%~0.15%。

上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，具體包含以下步驟：

a)對(duì)照品溶液：取乙酸乙烯酯、1,1-乙二醇二乙酸酯和苯適量，精密稱定，用乙腈溶解并用稀釋劑稀釋制成每1ml中約含乙酸乙烯酯0.38μg、1,1-乙二醇二乙酸酯75μg和苯0.1μg的溶液，作為對(duì)照品溶液；

b)供試品溶液：取供試品約500mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用乙腈溶解并用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；