[發明專利]一種利用RPA-LFS快速檢測溶藻弧菌的特異性引物對以及試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201911312608.7
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN111139307A
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 董井泉;酈娟;董宇;曾麗媚;趙盼盼;吉敬
• 申請（專利權）人: 江蘇海洋大學;連云港海恒生化科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 北京和聯順知識產權代理有限公司 11621
• 代理人: 閆超良

1.一種利用RPA-LFS快速檢測溶藻弧菌的特異性引物對，其特征在于，包括特異性引物對以及探針，特異性引物對包括：

上游引物：5’-AGCCCATTTTCTACTGACTCTAACACTGAC-3’

下游引物：5’-Biotin–GTTCGTGAATAACAATACGCAAACAGGAAG-3’探針：

5-FITC-TCAAGTAGAGCCGACTAAAACTCAGCCGAA[THF]CCAGCATCTAACACG-DDC-3’。

2.一種利用RPA-LFS快速檢測溶藻弧菌的試劑盒，其特征在于，其包含權利要求1所述的特異性引物對及探針、側流層析試紙條；

所述下游引物5'端用異硫氰酸熒光素、6-羧基熒光、四乙基羅丹明、四甲基異硫氰酸羅丹明、辣根過氧化酶、堿性磷酸酶、熒光基團中的一種進行標記；

所述探針5'端用羧基熒光素(FITC)標記，中間區域C堿基以及相鄰的腺嘌呤脫氧核糖核苷和胞嘧啶脫氧核糖核苷中的一個用[THF]進行替換，3'端封閉基因主要包括dideoxy-C(DDC),dideoxy-C(DDG),dideoxy-A(DDA)或dideoxy-T(DDT),或C3-spacer,或phosphate,或其他末端封閉基團。

3.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒還包括水解緩沖液、雙蒸水及醋酸鎂。

4.根據權利要求2所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述側流層析試紙條通過與水解緩沖液和樣品的混合物進行接觸顯色。

5.根據權利要求2～4任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括核酸提取試劑盒。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述核酸提取試劑為重組酶聚合酶擴增試劑。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述重組酶聚合酶擴增試劑包括重組酶、單鏈結合蛋白和鏈置換聚合酶。

8.權利要求1所述的引物對，以及權利要求2～7任一項所述的試劑盒在區分溶藻弧菌與其他弧菌以及其他細菌的樣本中的應用；

優選的，所述其他弧菌以及其他細菌，包括副溶血弧菌、霍亂弧菌、創傷弧菌、哈維氏弧菌、地中海弧菌、席羅弧菌、海洋發光弧菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、腸致病性埃希菌中的任一種。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述樣本包括水產動物、水產動物食物制品、養殖環境等。