[發明專利]一種丁酸梭菌的菌種保藏培養基及其培養方法

有效

• 申請號: 201911312445.2
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN110819578B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 吳微;張茜茜;李洋;周櫻;詹志春
• 申請（專利權）人: 湖北華揚科技發展有限公司;武漢新華揚生物股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/145
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 徐瑛

本發明提供了一種丁酸梭菌的菌種保藏培養基及培養方法，該菌種保藏培養基由按質量百分比計的如下組分：麥芽糊精0.5～7％，蛋白胨0.1～5％、玉米漿0.1～3％，無水乙酸鈉0.1～2％，氯化鈉0.1～3％，余量為水，調pH值至7.0±0.1，再加入碳酸鈣0.1～4％，115℃滅菌30min制備得到。本發明通過對培養基成分上的優化，使得丁酸梭菌由桿狀營養體形態轉化為穩定的芽孢休眠形態，有利于菌種的儲存保藏，大大提高菌種儲存保藏的質量。

技術領域

本發明屬于微生物培養技術領域，具體涉及一種丁酸梭菌的菌種保藏培養基及其培養方法。

背景技術

丁酸梭菌又名丁酸菌、酪酸梭菌，是一種專性厭氧的革蘭陽性菌，其能產生短鏈脂肪酸，具有較強的抵抗力，耐熱，耐酸，對抗生素也有較強的耐受性，因此歐盟在2003年就批準丁酸梭菌可以作為肉雞和斷奶仔豬的飼料添加劑，我國也于2013年將其納入《中國飼料添加劑品種目錄(2013)》的《附錄二》中。

目前，在實驗以及生產過程中，丁酸梭菌的儲存保藏培養基一般為RCM培養基，即強化梭菌培養基，其成分如下：酵母粉0.3％，牛肉粉1％，蛋白胨1％，葡萄糖0.5％，可溶性淀粉0.1％，三水合乙酸鈉0.5％，氯化鈉0.5％，半胱胺鹽酸鹽0.05％，pH7.0±0.1，115℃滅菌30min。然而，此RCM培養基廣泛運用于丁酸梭菌的增殖培養和計數，但是并不能使丁酸梭菌大量轉化為芽孢形態，不利于儲存保藏。

發明內容

本發明的目的是克服現有RCM培養基培養丁酸梭菌不能大量轉化為芽孢形態，不利于儲存保藏的問題。

為此，本發明提供了一種丁酸梭菌的菌種保藏培養基，由按質量百分比計的如下組分：麥芽糊精0.5～7％，蛋白胨0.1～5％、玉米漿0.1～3％，無水乙酸鈉0.1～2％，氯化鈉0.1～3％，余量為水，調pH值至7.0±0.1，再加入碳酸鈣0.1～4％，115℃滅菌30min制備得到。

具體的，所述丁酸梭菌的菌種保藏培養基由按質量百分比計的如下組分：麥芽糊精0.5～5％，蛋白胨0.1～3％、玉米漿0.1～3％，無水乙酸鈉0.1～1％，氯化鈉0.1～2％，余量為水，調pH值至7.0±0.1，再加入碳酸鈣0.1～2.5％，115℃滅菌30min制備得到。

具體的，所述丁酸梭菌的菌種保藏培養基由按質量百分比計的如下組分：麥芽糊精1～4％，蛋白胨0.1～2％、玉米漿0.5～2％，無水乙酸鈉0.1～0.5％，氯化鈉0.2～0.5％，余量為水，調pH值至7.0±0.1，再加入碳酸鈣0.5～2％，115℃滅菌30min制備得到。

具體的，所述丁酸梭菌的菌種保藏培養基由按質量百分比計的如下組分：麥芽糊精1％，蛋白胨0.5％、玉米漿1％，無水乙酸鈉0.3％，氯化鈉0.5％，余量為水，調pH值至7.0±0.1，再加入碳酸鈣1％，115℃滅菌30min制備得到。

具體的，所述pH值采用稀鹽酸調節。

另外，本發明還提供了一種丁酸梭菌的菌種保藏培養方法，包括如下步驟：

1)在無菌環境中挑取丁酸梭菌的單菌落于上述丁酸梭菌的菌種保藏培養基中，在34～37℃靜置培養24～36h；

2)取步驟1)培養后的培養液與甘油混合，置于-40℃下儲存48～72h后，再置于-80℃下儲存保藏。

具體的，所述步驟2)中甘油的濃度為40％，甘油與培養液混合的質量比為1:1。

與現有技術相比，本發明的有益效果：

(1)本發明提供的這種丁酸梭菌的菌種保藏培養基通過對其成分上的優化，利用麥芽糊精、蛋白胨、玉米漿中碳源和氮源有效加速菌體生長，同時加入碳酸鈣中和菌體生長代謝過程中產的酸，在生長過程中起緩沖作用，從而使得丁酸梭菌由桿狀營養體形態轉化為穩定的芽孢休眠形態，有利于菌種的儲存保藏，大大提高菌種儲存保藏的質量。