[發明專利]一株蛹蟲草及其在產蟲草素中的應用

有效

• 申請號: 201911308715.2
• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN111117896B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 劉慶國;應漢杰;陳勇;趙南;鄒亞男;唐成倫;柳東;余斌
• 申請（專利權）人: 江蘇集萃工業生物技術研究所有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/40;C12R1/645
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 胡建華

本發明公開了一株蛹蟲草及其在產蟲草素中的應用，其中，所述的蛹蟲草，其分類命名為蛹蟲草(Cordyceps militaris)，菌株名為CY1909，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2019年9月24日，保藏編號為CGMCC No.18581。本發明還公開了上述蛹蟲草在制備蟲草素中的應用，包括單批次發酵和反復批次發酵。其通過菌皮轉接實現了蛹蟲草的反復批次液態發酵，節省了蛹蟲草斜面制備及種子液生長時間，蟲草素的產量達到11.7g/L，發酵周期比單批次液態發酵縮短4天，提高了生產效率，實現了蟲草素的快速合成，為蟲草素工業化生產提供參考。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及到一株蛹蟲草及其在產蟲草素中的應用。

背景技術

蛹蟲草(Cordyceps militaris)又稱北冬蟲夏草、北蟲草，為子囊菌亞門、核菌綱、麥角菌目、麥角菌科、冬蟲夏草屬真菌，其作為新資源食品和一類新藥已獲得衛生部和國家食品藥品監督管理局批準進入市場。蛹蟲草含有多種活性物質，主要有蟲草素、腺苷、蟲草酸、多糖等，同時含有多種人體必需氨基酸和微量元素，其功效與冬蟲夏草類似，在保健食品和醫藥等面具有很好的實用價值，可作為野生冬蟲夏草的有效替代品。

蟲草素(Cordycepin)是第一個從真菌中分離出來的核苷類抗生素，具有抑菌、抗腫瘤、免疫調節和抗炎癥等廣譜的生物學活性。蟲草素主要來源于蛹蟲草子實體，但固體栽培蛹蟲草勞動強度大、成本高、子實體生長緩慢、產量較低，而液體培養可以克服以上缺點，已成為大量獲取蛹蟲草菌絲和蟲草素的主流。

然而，自然界原始菌株蟲草素生產活性較低，蛹蟲草斜面菌體生長周期長，種子液的制備耗時耗力，使得蟲草素產率仍不理想，嚴重制約了其大規模生產及開發應用。通過誘變選育，往往可以得到穩定高產的菌株，加以高效的發酵生產工藝，可有效促進蟲草素的工業化生產及其產品的開發應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一株高產蟲草素的蛹蟲草，以解決現有技術問題中蟲草素產量低、發酵周期長的問題。

為了解決上述問題，本發明采用如下技術方案：

一株蛹蟲草，其分類命名為蛹蟲草(Cordyceps militaris)，菌株名為CY1909，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日期為2019年9月24日，保藏編號為CGMCC No.18581。

本發明的蛹蟲草Cordyceps militaris CY1909的篩選方法，將蛹蟲草出發菌株CICC14014經等離子體誘變后，利用初篩得到的蟲草素生產菌株，再經過復篩得到高產蟲草素的菌株。

其具體步驟如下：

(1)孢子懸液制備：將活化好的蛹蟲草菌種接種至種子培養基中，26℃，180rpm恒溫震蕩培養2d后用Miracloth濾布過濾，收集濾液并稀釋，使得懸液含孢子量10⁶-10⁷個/mL。

(2)ARTP誘變：將步驟(1)所得懸液，取10μL均勻涂布在滅菌載片表面，在工作功率120W、工作氣流10SLM、照射距離2mm條件下設置照射時間0～180s，處理完畢后，將帶菌載片于裝有生理鹽水的EP管中充分混勻，稀釋涂布于固體培養基，26℃培養2～3d。

(3)初篩：將步驟(2)培養所得的平板菌落接種至96孔板種子培養基中(每孔裝液量1mL)，26℃培養2～3d，按10％接種量接入96孔板發酵培養基中，26℃下恒溫靜置發酵21～28d，測定蟲草素濃度，將高產蟲草菌株進行搖瓶復驗。

(4)搖瓶復篩：將步驟(3)所驗證的高產蟲草素的突變菌株，接種于裝有200mL種子培養基的1L三角瓶中，于26℃下培養2～3d，按10％接種量接入搖瓶發酵培養基(200ml/1L三角瓶)，26℃下靜置發酵21～28d，測定蟲草素含量，蟲草素含量最高的菌株選為目標菌種，完成篩選。