[發(fā)明專利]可特異性結(jié)合CKMB的結(jié)合蛋白、其應(yīng)用以及檢測CKMB的方法

有效

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• 申請日: 2019-12-18
• 公開（公告）號: CN113004411B
• 公開（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔鵬;何志強;孟媛;鐘冬梅;周全興;覃婷;王晨
• 申請（專利權(quán)）人: 菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/573;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發(fā)明公開了一種可特異性結(jié)合CKMB的結(jié)合蛋白、其應(yīng)用以及檢測CKMB的方法，涉及抗體技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開的結(jié)合蛋白包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括至少一個互補決定區(qū)。該結(jié)合蛋白可以特異性結(jié)合CKMB，并具有較好的結(jié)合活性和親和力，其可以用于檢測CKMB以及用于診斷與CKMB相關(guān)的疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗體技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及可特異性結(jié)合CKMB的結(jié)合蛋白、其應(yīng)用以及檢測CKMB的方法。

背景技術(shù)

肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes，CK)有四種同工酶形式：肌肉型(MM)、腦型(BB)、雜化型(MB)和線粒體型(MiMi)。MM型主要存在于各種肌肉細胞中，是由兩個相同的亞基組成的二聚體，BB型主要存在于腦細胞中，MB型主要存在于心肌細胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌線粒體中。CKMB(即雜化型肌酸激酶同工酶)通常分為MB 1與MB2兩個異型，在心肌細胞中，CKMB主要以MB 2的形式存在，一旦心肌細胞發(fā)生損傷就會釋放MB 2，使血清中的CKMB水平在短時間內(nèi)迅速升高，其升高時間通常于發(fā)病6h內(nèi)，且在24h左右達到峰值，并于72h后逐漸降低，直至恢復(fù)正常水平，這表明CKMB可于早期反映出心肌受損情況。由于CKMB在診斷急性心肌梗死中的敏感性和特異性比較高，經(jīng)過多年的深入研究和臨床分析，血清中CKMB升高已成為公認的診斷急性心肌梗死(AMI)和確認有無心肌壞死的重要指標，具有較高的診斷準確率，臨床上診斷心肌損害標準就是在排除服用對心肌有損害藥物及其他引起心肌酶、心電圖異常疾病的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)含CKMB在內(nèi)至少一項心肌酶增高合并心電圖可能表現(xiàn)異常。特別是各級醫(yī)院中對于AMI患者的溶栓治療以及急診經(jīng)皮冠狀動脈介入治療的使用越來越廣泛，這就要求必須要對AMI進行早期診斷。

由于AMI發(fā)病急，進展迅速，病人就診后需要盡快進行對癥治療。臨床應(yīng)用較多的檢測方法是大型生化儀，其檢測結(jié)果準確，且可以覆蓋多個檢測指標。但是由于其耗時長，儀器每天需要校準和室內(nèi)質(zhì)控，不適合AMI急診檢測需要。瓊脂糖凝膠電泳在分離CKMB時，主要根據(jù)CK各同工酶不同的分子量及電荷，主要通過掃描各酶譜，獲取各區(qū)帶所占的百分比，并與總酶CK的活力相結(jié)合，獲取各同工酶的酶活力，但該方法與免疫抑制法相比操作較為復(fù)雜，耗時較長且無法達到CKMB質(zhì)量的定量檢測?；诿庖邔游龅哪z體金顆粒檢測方法具有使用簡便、快速的特點，在傳染病以及自身抗原檢測方面有較多應(yīng)用。但是，由于靈敏度不高、不能準確定量，限制了其在AMI檢測方面的應(yīng)用。

目前在臨床實驗室多采用免疫抑制法測定CKMB，該方法簡單迅速，但特異性差。其檢測原理是通過抗CK-M抗體，使M亞基活性受到抑制，對B亞基的活性進行檢測，因為CKBB在健康人體中的含量極少，可直接忽略，將所測結(jié)果乘以2，即可獲得血液中CKMB的活性。該方法具有操作簡單、檢測速度快、成本低等優(yōu)勢，在臨床實驗室檢驗中被廣泛應(yīng)用。但后來發(fā)現(xiàn)，肌肉分解和一些非心臟疾病均可導(dǎo)致B亞基含量升高從而帶來CKMB的假陽性增加。

酶質(zhì)量法采用化學(xué)免疫發(fā)光技術(shù)進行定量檢測，以雙抗體夾心法為主，使抗人CKMB抗體包被于磁微粒等固相載體，其標記物為酶標抗人CKMB抗體，對CKMB進行定量分析檢測。該檢測方法對抗原抗體反應(yīng)具有較高的特異性，與CKBB及CKMM無交叉反應(yīng)，具有更高的靈敏度，不受血清中巨CK及其他酶類等因素的影響。因此，酶質(zhì)量法在準確性上有更明顯的優(yōu)勢。但酶質(zhì)量法所用的抗人CKMB抗體也多為雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的鼠源單克隆抗體，其受小鼠個體影響特別大，生產(chǎn)不穩(wěn)定、批間差異大，小鼠自身抗體純化難度大。因此，現(xiàn)有的抗CKMB抗體由于活性低、親和力差，無法很好地應(yīng)用于CKMB的檢測中。因此，本領(lǐng)域?qū)τ谟行姨禺愋越Y(jié)合CKMB并可對其進行檢測的抗體存在著強烈需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供可特異性結(jié)合CKMB的結(jié)合蛋白、其應(yīng)用以及檢測CKMB的方法。本發(fā)明提供的結(jié)合蛋白可以特異性結(jié)合CKMB，并具有較好的結(jié)合活性和親和力，其可以用于檢測CKMB以及用于診斷與CKMB相關(guān)的疾病，本發(fā)明為CKMB的有效檢測和與CKMB相關(guān)的疾病的診斷提供了更多選擇。

名詞定義