[發明專利]一種新型玻璃化冷凍復融觀察裝置及其應用

有效

• 申請號: 201911284072.2
• 申請日: 2019-12-13
• 公開（公告）號: CN110927951B
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 李曉虹;杜輝;曾玉翠;李雨珊;吳瑞芳
• 申請（專利權）人: 北京大學深圳醫院
• 主分類號: G02B21/34
• 分類號: G02B21/34;G02B21/30
• 代理公司: 廣州浩泰知識產權代理有限公司 44476
• 代理人: 李巍

本發明公開了一種新型玻璃化冷凍復融觀察裝置及其應用，包括立式顯微鏡、底座、圓環形容器、觀察載體和載體移動器；所述底座置于所述立式顯微鏡的置物臺上，所述底座的中部右側鑲嵌一個扇形的可調控溫度的恒溫發熱底板；所述圓環形容器的內部通過隔板分割為5個扇形小格；所述觀察載體的左側表面設有一圓柱體凹槽，所述圓柱體凹槽用于盛載待觀察的液滴；所述載體移動器用于移動觀察載體。通過本發明實現可便捷地觀察快速冷凍和復融過程中不同玻璃液的玻璃化狀態，完成初步玻璃態篩查工作及復融溫度的優化，具有快速、簡單方便的特點，極大減少無效工作。同時提高觀察準確度。

技術領域

本發明涉及玻璃液觀察領域，具體涉及一種新型玻璃化冷凍復融觀察裝置及其應用。

背景技術

組織冷凍保存在生殖醫學領域中的應用價值己得到公認，并取得了一些成就，但進展仍然緩慢，其中玻璃化冷凍法最早于2002年應用于在卵巢組織冷凍保存研究中，原理是高濃度冷凍保護液在快速降溫時可形成玻璃化液，無細胞內外冰晶形成，更適合冷凍保存結構復雜的人卵巢組織，2013年第一例玻璃化凍存卵巢組織片自體移植后嬰兒出生。玻璃液濃度越高，玻璃態越易形成，但隨濃度升高其對組織毒性也越大，如何篩選出最適合人卵巢組織的玻璃液配伍及濃度就成為提高人卵巢組織冷凍保存效果的關鍵步驟；同時玻璃液在復融的過程中也可能會有冰晶的形成，如何快速確定最合適的復融溫度也是提高冷凍效果的重要環節。

目前常用篩選最優玻璃液及組織平衡時間的方法有：①組織形態學分析；②移植后或體外培養性激素水平的測定；③組織細胞內超微結構變化；④組織細胞的凋亡情況；⑤卵泡的增殖發育能力等。這些方法檢測周期長，不靈活，不能及時發現玻璃液配伍的問題，極易使后續檢測成為無效工作。

發明內容

針對上述問題，本發明主要解決的技術問題是提供一種新型玻璃化冷凍復融觀察裝置，所述新型玻璃化冷凍復融觀察裝置應用在最優玻璃液篩選和復融溫度的優化時，可便捷地觀察快速冷凍和復融過程中不同玻璃液的玻璃化狀態，完成初步玻璃態篩查工作及復融溫度的優化，具有快速、簡單方便的特點，極大減少無效工作。同時提高觀察準確度。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種新型玻璃化冷凍復融觀察裝置，包括立式顯微鏡，所述立式顯微鏡連接拍攝裝置；還包括底座、圓環形容器、觀察載體和載體移動器；

所述底座置于所述立式顯微鏡的置物臺上，所述底座的中部右側鑲嵌一個扇形的可調控溫度的恒溫發熱底板，所述恒溫發熱底板電性連接控制裝置；

所述圓環形容器的內部通過隔板分割為5個扇形小格，分別是第一扇形小格、第二扇形小格、第三扇形小格、第四扇形小格和第五扇形小格；所述第一扇形小格和所述第二扇形小格之間的所述隔板的下部為中空設計，所述第一扇形小格和所述第二扇形小格的底部相連通；所述第三扇形小格和所述第五扇形小格為空氣隔層；所述第四扇形小格的底部形狀與所述恒溫發熱底板相吻合；還設有與所述第一扇形小格相配合的扇形蓋子；

所述觀察載體的左側表面設有一圓柱體凹槽，所述圓柱體凹槽用于盛載待觀察的液滴；所述載體移動器用于移動觀察載體。

優選的，所述底座的上表面設有與所述圓環形容器相配合的圓形凹位。如此設置，便于圓環形容器通過圓形凹位快速準確地與底座相配合，同時防止觀察過程中圓環形容器移位。

優選的，所述觀察載體采用耐低溫防霧玻璃材質。如此設置，考慮到觀察載體放置于超低溫的液氮中，采用耐低溫材質，延長觀察載體的壽命

優選的，所述觀察載體的右側邊位處設有兩個長方體凹槽，所述長方體凹槽為上下對稱設置，所述長方體凹槽內鑲嵌有磁鐵；所述載體移動器為V字形的鑷子，所述鑷子的兩側的展開端均設有與所述長方體凹槽相配合的齒狀凸起，所述齒狀凸起為鐵素體不銹鋼材質。如此設置，通過鐵素體不銹鋼材質的齒狀凸起與鑲嵌有磁鐵的長方體凹槽相配合，利用磁力相吸，防止移動過程中觀察載體中途掉落。