[發(fā)明專利]一株用于低溫污水脫氮的異養(yǎng)硝化細(xì)菌及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911230103.6
• 申請日: 2019-12-04
• 公開（公告）號: CN110964663A
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王曉慧;劉琳;海熱提·吐爾遜;李媛
• 申請（專利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/01;C02F101/16
• 代理公司: 北京思海天達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11203
• 代理人: 張立改

1.一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌，經(jīng)經(jīng)16S rDNA分子鑒定為Acinetobacter johnsoniistrain，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2019年10月25日，保藏編號為CGMCC No.18736。

2.按照權(quán)利要求1所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌，從冬季污水處理廠生物轉(zhuǎn)盤泥樣中分離、篩選純化得到。

3.按照權(quán)利要求2所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌，所述低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌的篩選方法為：取適量生物轉(zhuǎn)盤泥樣加入到裝有無菌水的錐形瓶中，放于搖床上震蕩3h后，用移液槍吸取液體接種于已滅菌的富集培養(yǎng)基中，于13℃，150rpm條件下培養(yǎng)5d；再取富集培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于新的富集培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)接3次，共富集15天；

取富集培養(yǎng)液接入裝有無菌水的試管中，按倍比進(jìn)行稀釋，分別得到菌種濃度為10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度的細(xì)菌懸浮液；然后采用平板涂布法，分別從各梯度細(xì)菌懸浮液中吸取部分涂布于異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基上，置于13℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別挑取不同形態(tài)的菌落進(jìn)行劃線分離，分離純化3次以上直至菌落特征基本一致，然后接種于斜面培養(yǎng)基上并保存于4℃冰箱；

上述所述富集培養(yǎng)基：氯化銨(NH₄Cl)0.5g，乙酸鈉(CH₃COONa)3.5g，硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)0.05g，磷酸氫二鉀(K₂HPO₄·3H₂O)0.2g，氯化鈉(NaCl)0.12g，硫酸錳(MnSO₄·H₂O)0.01g，硫酸亞鐵(FeSO₄·7H₂O)0.01g，蒸餾水1000mL，pH值7.0-7.4；若需固體培養(yǎng)基，則加入瓊脂；

異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基：氯化銨(NH4Cl)0.382g，乙酸鈉(CH3CO0Na)2.0g，硫酸鎂(MgSO4·7H2O)0.05g，磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)0.2g，氯化鈉(NaCl)0.12g，硫酸錳(MnSO4·H2O)0.01g，硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)0.01g，蒸餾水1000mL，pH值7.0-7.4；若需固體培養(yǎng)基，則加入瓊脂；

將初篩所得的18株菌株在活化培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，接種于異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基中，在13℃，150rpm下培養(yǎng)5天后，取樣離心測量氨氮去除率，可得所述的菌株BC-15，作為后續(xù)研究的目的菌株；

上述活化培養(yǎng)基：胰蛋白胨5g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，蒸餾水1000mL，pH值7.0-7.4。

4.按照權(quán)利要求1所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌，其基因列表見SED ID NO:1。

5.按照權(quán)利要求1所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌的應(yīng)用，用于低溫污水脫氮處理。

6.按照權(quán)利要求5所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌的應(yīng)用，在13℃條件下對以NH₄⁺-N為氮源的富營養(yǎng)水體進(jìn)行脫氮處理。

7.按照權(quán)利要求5所述的一株低溫異養(yǎng)硝化細(xì)菌的應(yīng)用，將低溫硝化菌擴(kuò)大培養(yǎng)后按3％的比例投入含氨態(tài)氮的水體中。