[發(fā)明專利]一種血清淀粉樣蛋白A突變體及其應(yīng)用和制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201911191944.0
• 申請(qǐng)日: 2019-11-28
• 公開（公告）號(hào): CN110746499A
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王民燕;劉東海;褚旭明;夏杰;王益棟;李雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波賽珀生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/47
• 分類號(hào): C07K14/47;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 11246 北京眾合誠(chéng)成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王學(xué)芝

1.一種血清淀粉樣蛋白A突變體，其特征在于：所述突變體具有SEQ ID NO.1所述的氨基酸序列，經(jīng)過幾個(gè)氨基酸的替換后仍具有血清淀粉樣蛋白的抗原性，得到唯一的突變體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清淀粉樣蛋白A突變體，其特征在于：所述突變體具有SEQID NO.1所述的氨基酸序列。

3.一種血清淀粉樣蛋白A突變體的基因，其特征在于：所述基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清淀粉樣蛋白A突變體的基因，其特征在于：所述基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

5.一種重組載體，其特征在于：所述載體含有如權(quán)利要求3所述的基因。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清淀粉樣蛋白A突變體，在制備血清淀粉樣蛋白A抗原中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血清淀粉樣蛋白A突變體，在血清淀粉樣蛋白A檢測(cè)試劑中標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制中的應(yīng)用。

8.一種血清淀粉樣蛋白A突變體的制備方法，包括以下步驟：

1)血清淀粉樣蛋白A突變體氨基酸序列的設(shè)計(jì)：根據(jù)NCBI網(wǎng)站公布的SAA蛋白的氨基酸序列以及該序列的特征，將第52位氨基酸由Ala替換為Val，第57位氨基酸由Val替換為Ala，第60位氨基酸由Asp替換為Asn，第71位氨基酸由His替換為Arg，獲得SEQ ID NO.1；

2)血清淀粉樣蛋白A突變體基因的優(yōu)化和獲得：采用大腸桿菌優(yōu)勢(shì)密碼子對(duì)SEQ IDNO.1進(jìn)行優(yōu)化，得到SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，通過退火延伸PCR技術(shù)，獲得由大腸桿菌優(yōu)勢(shì)密碼子組成的血清淀粉樣蛋白突變體基因；

3)血清淀粉樣蛋白A突變體表達(dá)載體的構(gòu)建：將步驟2)中獲得的大腸桿菌的血清淀粉樣蛋白突變體基因序列用NdeI和XhoI進(jìn)行雙酶切，與同樣經(jīng)過NheI和XhoI雙酶切的pET-32a(+)載體進(jìn)行連接，得到表達(dá)載體；

4)血清淀粉樣蛋白A突變體的表達(dá)純化：將步驟3)中獲得的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21感受態(tài)細(xì)胞，得到血清淀粉樣蛋白A突變體表達(dá)菌株，進(jìn)行培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達(dá)、純化以及透析除鹽，最終獲得所述可溶性血清淀粉樣蛋白A突變體。