[發(fā)明專利]口蹄疫O型合成肽疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911153207.1
• 申請日: 2019-11-22
• 公開（公告）號: CN110885362B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設計）人: 吳冬荀;肖進;向王震;王飛;張蕾
• 申請（專利權）人: 中牧實業(yè)股份有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K39/135;A61P31/14
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

本發(fā)明提供一種用于制備口蹄疫O型合成肽疫苗及其制備方法和應用。口蹄疫O型合成肽疫苗包括抗原多肽組合物，抗原多肽組合物包括序列1和序列2所示的多肽。本發(fā)明提供的口蹄疫合成肽疫苗具有良好的免疫效力，且疫苗的抗原為化學合成多肽，不含口蹄疫病毒核酸粒子，安全性高。因此本發(fā)明的疫苗可以有效應對目前口蹄疫流行毒株、不存在生物安全性，易于大規(guī)模合成，具有良好的應用前景。本發(fā)明還提供了所述多肽和肽疫苗的制備方法以及其制藥用途。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體而言，本發(fā)明涉及一種口蹄疫合成肽疫苗，以及其制備方法。

背景技術

口蹄疫(foot and mouth disease，簡稱FMD)是一種偶蹄動物發(fā)生的急性、高度接觸性、發(fā)熱性傳染病，在世界范圍內廣泛分布。口蹄疫的傳染性高，傳播迅速，感染豬、豬、羊等牲畜后將導致幼畜死亡，成年動物生產(chǎn)能力急劇下降，因此嚴重危害畜牧業(yè)的發(fā)展和肉食及其畜產(chǎn)品的生產(chǎn)和供應。目前，口蹄疫使動物及動物產(chǎn)品的市場流通和國際貿易受到極大的封鎖和限制，給流行國家和地區(qū)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失。

口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的。口蹄疫病毒屬于細小核糖核酸病毒，具有多型性、易變性等特點。目前，已知全世界有7種血清型的口蹄疫病毒：A、O、C、Sat1(南非I型)、Sat2(南非II型)、Sat3(南非III型)和Asia I(亞洲I型)。這些主型中的每一種又分若干亞型，目前發(fā)現(xiàn)的亞型已有70多種。血清型A、O、C和Asia I型的口蹄疫病毒最為常見，其中血清型A病毒的變種最多，具有超過30種亞型。研究結果表明，口蹄疫病毒的衣殼蛋白是由四種結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4組成的，每種各60個。VP1-VP3組成衣殼蛋白亞單位，位于衣殼蛋白的外側，而VP4位于病毒顆粒的內部。

口蹄疫病毒各型之間的抗原性不同，彼此之間不能交互免疫。而且，在同一種血清型中抗原差異的程度也很大，以至于能夠有效地抵抗一種亞型的口蹄疫疫苗可能針對同一血清型中的另一種亞型沒有保護性。此外，口蹄疫毒株的抗原性還在不斷發(fā)生變化，隨著時間的推移，原有疫苗的效力減弱甚至消失，因此給口蹄疫的防治工作帶來了很大的困難。

當前在我國豬群中流行的口蹄疫主要是O型和A型口蹄疫。我國對口蹄疫實行強制性免疫，疫苗免疫是防治口蹄疫的主要手段。但是，我國現(xiàn)行使用的口蹄疫疫苗主要是病毒滅活疫苗，其存在著生物安全性差、副反應大、產(chǎn)品質量不穩(wěn)定等問題。相比之下，目前世界上很多國家已經(jīng)停止使用滅活疫苗，也禁止從使用滅活疫苗的國家進口畜產(chǎn)品。由此可見，在口蹄疫防治方面，非常有必要開發(fā)新型口蹄疫疫苗。

在口蹄疫新型疫苗的研究方面，先后有基因工程亞單位疫苗、口蹄疫病毒載體疫苗、口蹄疫基因工程修飾疫苗的研究報道，但是其在免疫效果、經(jīng)濟性方面存在著問題，影響了這些新型疫苗的使用。此外，這些疫苗對于當前已經(jīng)發(fā)生變異的流行毒株往往效果較差，不能有效地保護動物。因此，本領域仍然存在對于安全、有效的口蹄疫新型疫苗的需求。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種用于制備口蹄疫O型合成肽疫苗的抗原多肽，多肽組合物，以及含有該多肽組合物的疫苗。

為實現(xiàn)上述目的，本實驗室根據(jù)口蹄疫O型流行毒的抗原表位設計了2條氨基酸組成的多肽序列，分別為序列表中序列1和序列2所示的多肽。

采用固相法合成，與ISA50V佐劑混合制成油乳劑疫苗。通過效力試驗證明，口蹄疫O型合成肽疫苗針對MYA/98強毒攻擊的PD₅₀值均超過6，達到保護要求，具有保護試驗動物豬免受病毒攻擊的能力。安全性試驗證明口蹄疫合成肽疫苗對豚鼠、小鼠及豬無副反應出現(xiàn)，安全性高，無散毒危險，所以具有良好的推廣前景和市場價值。

合成肽疫苗極大的提高了口蹄疫疫苗的安全性和產(chǎn)品穩(wěn)定性，并且其制備工藝更簡單、生產(chǎn)成本更低廉、疫苗質量更加可靠，利于規(guī)模化生產(chǎn)。作為一種新型口蹄疫疫苗，其優(yōu)點可以為企業(yè)和市場帶來新的競爭力和經(jīng)濟增長點，市場空間巨大。

本發(fā)明采用了以下技術方案：