[發明專利]α-D-葡萄糖檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201911148954.6
• 申請日: 2019-11-24
• 公開（公告）號: CN110715923A
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 李立和;張健;劉寶陽
• 申請（專利權）人: 天津市寶坻區人民醫院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種α?D?葡萄糖檢測試劑盒，屬于利用可見光，通過測試反應結果顏色的變化來測試材料的方法。本發明的技術方案是：試劑Ⅱ中僅有變旋酶一種有效組分，葡萄糖色原物及工具酶同在試劑Ⅰ中，由于體液中β?D?葡萄糖生成的紅色醌亞胺和α?D?葡萄糖為β?D?葡萄糖生成的紅色醌亞胺先后呈色，以試劑Ⅰ反應產生紅色醌亞胺為空白，由試劑Ⅱ反應產生的紅色醌亞胺計算出α?D?葡萄糖的含量，本發明能夠檢測α?D?葡萄糖，使用試劑盒檢測時不受內源性β?D?葡萄糖影響，是一種快捷、準確性更高的α?D?葡萄糖檢測方法。

技術領域

本發明屬于一種包含酶的測定方法；或是利用可見光，通過測試反應的結果產生顏色變化來測試材料的方法，特別是涉及一種用生化分析儀快捷、準確檢測體液中α-D-葡萄糖的測定方法。

背景技術

D-葡萄糖是C原子上的-OH在右邊，又名右旋糖，有開鏈結構和環形結構，有α-及β-異構體，以游離態存在于葡萄、蜂蜜、甜水果、動物的血液、脊髓液和淋巴液等中，又作為多糖的組分及糖甙的形式廣存于自然界中，由淀粉水解而得。物理性質為白色結晶性粉末，相對密度1.544(25℃)，α-D-葡萄糖的熔點146℃，[α]D20為 +113.4°,β-D-葡萄糖的熔點148～150℃，[α]D20為 +19.2°。把兩者溶液放置時，其[α]D20最后都為 +52.5°。溶于水，微溶于乙醇，甜度約為蔗糖的 70%。化學性質：D-葡萄糖具有一般醛糖的化學性質，在氧化劑作用下，生成葡萄糖酸，葡萄糖二酸或葡萄糖醛酸；在還原劑作用下，生成山梨醇；在弱堿作用下，葡萄糖可與另兩種結構相近的六碳糖（果糖和甘露糖）三者之間通過烯醇式相互轉化。葡萄糖的分子式為C₆H₁₂O₆，分子中含五個羥基和一個醛基，是己醛糖。其中C-2，C-3，C-4和C-5是不同的手性碳原子，有16個具有旋光性的異構體，D-葡萄糖是其中之一。葡萄糖幾乎以環狀的半縮醛結構存在，成環后，使原來的羰基碳原子(C-1)變成了手性碳原子，C-1上新形成的半縮醛羥基在空間的排布方式有兩種可能。半縮醛羥基與決定單糖構型的羥基(C-5上的羥基)在碳鏈同側的叫做α型，在異側的稱為β型。α型和β型是非對映異構體。它們的不同點是C-1上的構型，因此又稱為異頭物(端基異構體)。它們的熔點和比旋光度都不同葡萄糖的變旋現象，就是由于開鏈結構與環狀結構形成平衡體系過程中的比旋光度變化所引起的。在溶液中α-D-葡萄糖可轉變為開鏈式結構，再由開鏈結構轉變為β-D-葡萄糖;同樣β-D-葡萄糖也變轉變為開鏈式結構，再轉變為α-D-葡萄糖。經過一段時間后，三種異構體達到平衡，形成一個互變異構平衡體系，其比旋光度亦不再改變。不僅葡萄有變旋現象，凡能形成環狀結構的單糖，都會產生變旋現象。α-D-吡喃葡萄糖除C-1上的-OH連在α鍵上，其它三個碳上的-OH和-CH₂OH都連在e鍵上，而β-D吡喃葡萄糖C-1上的-OH及所有比較大的原子團(-OH，-CH₂OH)都連在e鍵上，因而β型的構象更為穩定，如圖1所示。故在溶液中達到平衡時，β型占64%，而α型僅占36%。

在實驗室葡萄糖測定方法中常用葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法、葡萄糖脫氫酶法，在這些方法中測定的為總葡萄糖含量，包括α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖之和，其中實驗室最常用方法為葡萄糖氧化酶法，在測定試劑中含有變旋酶，變旋酶使α-D-葡萄糖轉化β-D-葡萄糖，葡萄糖氧化酶將β-D-葡萄糖氧化成D-葡萄糖酸和H₂O₂ ，己糖激酶法可以將α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖同時進行磷酸化，葡萄糖脫氫酶可以將α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖同時進行脫氫反應。