[發明專利]一種豬卵母細胞體外成熟培養液及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201911148648.2
• 申請日: 2019-11-21
• 公開（公告）號: CN110684723B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 金君學;孫婧陶
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種豬卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于，所述豬卵母細胞體外成熟培養液含有雷美替胺。

2.根據權利要求1所述的豬卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于，所述培養液由基礎培養液TCM-199，青霉素，鏈霉素，NaHCO₃，4-羥乙基哌嗪乙磺酸Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸鈉，胰島素，半胱氨酸，表皮生長因子，豬卵泡液，孕馬血清促性腺激素PMSG，人絨毛膜促性腺激素hCG和雷美替胺組成。

3.根據權利要求2所述的豬卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于，所述卵母細胞體外成熟培養液，以TCM-199為基準計，青霉素的質量濃度為0.048-0.066g/L，鏈霉素的質量濃度為0.08-0.12g/L，NaHCO₃的濃度為1.95-2mmol/L，Hepes的濃度為9.5-10mmol/L，聚乙烯醇的質量濃度為2.5-3.5g/L，丙酮酸鈉的濃度為0.9-0.95mmol/L，胰島素的質量濃度為8-12ng/mL，半胱氨酸的濃度為0.5-0.7mmol/L，表皮生長因子的質量濃度為8-12ng/mL，豬卵泡液體積濃度為75-125mL/L，PMSG的濃度為8-12IU/mL，hCG的濃度為8-12IU/mL，雷美替胺的濃度為10^-11-10^-7mol/L。

4.根據權利要求3所述的豬卵母細胞體外成熟培養液，其特征在于，所述卵母細胞體外成熟培養液，以TCM-199為基準計，青霉素的質量濃度為0.06g/L，鏈霉素的質量濃度為0.1g/L，NaHCO₃的濃度為1.99mmol/L，Hepes的濃度為9.8mmol/L，聚乙烯醇的質量濃度為3g/L，丙酮酸鈉的濃度為0.91mmol/L，胰島素的質量濃度為10ng/mL，半胱氨酸的濃度為0.6mmol/L，表皮生長因子的質量濃度為10ng/mL，豬卵泡液體積濃度為100mL/L，PMSG的濃度為10IU/mL，hCG的濃度為10IU/mL，雷美替胺的濃度為10^-11mol/L。

5.權利要求2-4任一所述的豬卵母細胞體外成熟培養液的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)豬卵泡液的獲取：從豬卵巢的卵泡中抽出液體，對所述液體進行離心，保留上清液，對上清液進行過濾除雜，獲得豬卵泡液；

(2)將TCM-199，青霉素，鏈霉素，NaHCO₃，Hepes，聚乙烯醇，丙酮酸鈉，胰島素，半胱氨酸，表皮生長因子，PMSG，hCG，雷美替胺和步驟(1)所獲得的豬卵泡液混合，獲得培養液粗液；

(3)對步驟(2)所獲得的培養液粗液過濾除菌，獲得所述的豬卵母細胞體外成熟培養液。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的豬卵巢溫度是28-35℃。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的離心是4-6℃條件下，12000-14000r/min，離心30-60min。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的過濾除雜是用0.45μm的濾器進行過濾。

9.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述的過濾除菌是用0.22μm的濾器進行過濾。

10.權利要求1-4任一所述的豬卵母細胞體外成熟培養液在體外培養豬卵母細胞上的應用。