[發明專利]具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分的制備方法

在審

• 申請號: 201911127266.1
• 申請日: 2019-11-18
• 公開（公告）號: CN110801460A
• 公開（公告）日: 2020-02-18
• 發明（設計）人: 阿吉艾克拜爾·艾薩;孫光映;木尼熱·阿布都艾尼;古麗契熱·阿地力;趙永昕
• 申請（專利權）人: 中國科學院新疆理化技術研究所
• 主分類號: A61K36/185
• 分類號: A61K36/185;A61P39/06;A61P31/04
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所(普通合伙) 65106
• 代理人: 張莉

1.一種具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分的制備方法，其特征在于按下列步驟進行：

a、通過高效液相色譜儀，以甲醇或乙腈為有機相A相，0.1%甲酸水為水相B相，通過液相色譜的雙泵調整A相和B相至流動相為甲醇-0.1%甲酸水混合物，其中甲醇含量范圍在5%-45%之間，或流動相為乙腈-0.1%甲酸水混合物，其中乙腈含量在5%-30%之間，流速控制為2.4 mL/min，柱溫室溫，平衡反相C18色譜柱，長度250 mm，內徑10 mm，填充物粒徑10 μm，平衡至基線水平；

b、分別稱取500 mg，750 mg，1000 mg，1500 mg的石榴皮提取物大孔樹脂純化物，均溶于水中配制成濃度為500 mg/mL的溶液，離心去除懸浮在其中的沉淀，至于溫度4℃冰箱中放置15小時，將樣品分別進樣至步驟a中平衡好的色譜柱中，進樣后即開始接取組分，將所得組分溶液按每分鐘一個的速率接在容器里，轉移至液相小瓶中待測，從0 min-40 min的區間里，共計接取40個組分；

c、使用高效液相色譜儀，配以紫外檢測器和分析型反相C18色譜柱，長度250 mm，內徑4.6 mm，填充物粒徑10 μm，柱溫室溫，流速1.0 mL/min，監測波長254 nm，對步驟b所得各組分樣品，進樣體積5微升，記下各樣品中安石榴苷的峰面積A及所有峰的總面積A₀，以接下的各組分的序號數（x）為橫坐標，對應各組分安石榴苷和前雜質的占比為縱坐標，在同一張圖上做η（%）-x和α（%）-x圖；

d、將步驟b中上樣量為500 mg時所得的一系列組分，合并0 min至40 min之間的組分，于溫度50℃濃縮至5 mL，真空冷凍干燥得到組分1；或上樣量為750 mg所得的一系列組分，合并0 min至40 min之間的組分，于溫度50℃濃縮至5 mL，真空冷凍干燥得到組分2；或上樣量為1000 mg所得的一系列組分，合并0 min至40 min之間的組分，于溫度50℃濃縮至5 mL，真空冷凍干燥得到組分3；或上樣量為1500 mg所得的一系列組分，合并0 min至40 min之間的組分，于溫度50℃濃縮至5 mL，真空冷凍干燥得到組分4，即得到具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分。

2.如權利要求1所述的一種具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分的制備方法，其特征在于步驟a中使用的流動相為甲醇-0.1%甲酸水混合溶液，甲醇含量在10%-30%之間；或流動相為乙腈-0.1%甲酸水混合溶液，乙腈含量在6%-20%之間。

3.如權利要求1所述的一種具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分的制備方法，其特征在于步驟d中上樣量為500 mg時所得的一系列組分，合并11 min至30min之間的組分；或上樣量為750 mg時所得的一系列組分，合并9 min至26 min之間的組分；或上樣量為1000 mg所得的一系列組分，合并8 min至22 min之間的組分；或上樣量為1500mg時所得的一系列組分，合并8 min至17 min之間的組分。

4.如權利要求1所述的一種具有強抗氧化及金黃色葡萄球菌抑制活性的石榴皮有效組分的制備方法，其特征在于對于C18色譜柱，上樣量范圍在石榴皮大孔樹脂純化物與所用C18填料質量比為250-1250 mg/g之間。