[發明專利]一種羅紅霉素特異性結合核酸適體及其應用

有效

• 申請號: 201911124279.3
• 申請日: 2019-11-15
• 公開（公告）號: CN110923237B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 林俊生;蔣靈麗;蘇藝;張偉;賴振權;李健宜;蘇麗麗;趙芬
• 申請（專利權）人: 華僑大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

本發明公開了一種羅紅霉素特異性結合核酸適體及其應用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.01至09中的任一所示。本發明能夠與羅紅霉素特異性結合，可依此制備羅紅霉素定量檢測試劑盒。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種羅紅霉素特異性結合核酸適體及其應用。

背景技術

羅紅霉素屬于大環內酯抗生素，主要作用于革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等。這類抗生素已成為全球第二大用量抗生素，同時其在環境中的污染未能得到有效控制的現狀以及對人類健康產生的不利影響引起了重視。目前檢測羅紅霉素常用方法為液相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜法和質譜法(分析試驗室，2018，v.37(05)：43-46.)等，但這些方法儀器昂貴，需要專門的技術人員且又操作復雜、費時耗力。因此，有必要尋找一種快速、簡便、高效的檢測羅紅霉素的方法。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種羅紅霉素特異性結合核酸適體。

本發明的另一目的在于提供上述羅紅霉素特異性結合核酸適體的應用。

本發明的再一目的在于提供一種

本發明的技術方案如下：

一種羅紅霉素特異性結合核酸適體，其核苷酸序列如SEQ ID NO.01至09中的任一所示。

在本發明的一個優選實施方案中，其核苷酸序列如SEQ ID NO.01所示。

本發明的另一技術方案如下：

上述羅紅霉素特異性結合核酸適體在檢測羅紅霉素中的應用。

一種羅紅霉素檢測試劑盒，包括羅紅霉素特異性結合核酸適體溶液，其溶劑為DPBS，該羅紅霉素特異性結合核酸適體的核苷酸序列如SEQ ID NO.01至09中的任一所示。

在本發明的一個優選實施方案中，所述羅紅霉素特異性結合核酸適體的核苷酸序列如SEQ ID NO.01所示。

在本發明的一個優選實施方案中，還包括標準羅紅霉素溶液，其以DPBS為溶劑。

在本發明的一個優選實施方案中，還包括染料溶液，其以DPBS為溶劑，該染料能夠結合ssDNA中的雙鏈部位。

進一步優選的，所述染料為SYBR Green I。

本發明的有益效果是：本發明能夠與羅紅霉素特異性結合，可依此制備羅紅霉素定量檢測試劑盒。

附圖說明

圖1為本發明實施例1中優化羅紅霉素靶標溶液濃度qPCR曲線圖。

圖2為本發明實施例1中羅紅霉素適體第16輪篩選qPCR曲線圖。

圖3為本發明實施例2中陽性克隆在8％尿素變性膠電泳中結果。

圖4至圖12依次為本發明實施例2中的SEQ ID NO.01至SEQ ID NO.09序列二級結構示意圖。

圖13為本發明實施例3中SGI法非線性擬合曲線圖，橫坐標為靶標濃度，縱坐標為熒光比值(F-F0)/F0，F0為不加靶標組對照。

圖14為本發明實施例4中抗生素終濃度均為0.4098μM時，不同抗生素與SEQ IDNO.01結合圖，橫坐標為各抗生素組，縱坐標為熒光比值(F-F0)/F0，**代表極顯著差異，N均為5。

圖15為本發明實施例5中在開發檢測羅紅霉素試劑盒前不同濃度羅紅霉素溶液組和DPBS溶液組的熒光強度圖情況，橫坐標為波長，縱坐標為熒光強度。