[發明專利]CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201911102601.2
• 申請日: 2019-11-12
• 公開（公告）號: CN110819722A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 謝少華
• 申請（專利權）人: 愛爾生基因醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 武漢藍寶石專利代理事務所(特殊普通合伙) 42242
• 代理人: 王振宇

本發明提供了一種CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物、試劑盒及檢測方法，其中檢測引物包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突變型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突變型通用下游引物，所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，CYP2D6*10突變型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通用下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。本申請通過所述檢測引物及包含該引物的試劑盒，直接探索PCR過程中熒光信號值從而獲得檢測的結果，不需要PCR后處理或電泳檢測，克服了常規PCR技術的易污染、出現假陽性的技術問題，能有效避免出現非特異性擴增難題，適合大批量樣本的檢測。該方法靈敏度高、特異性強，可以指導多種病癥患者根據個體的基因組信息實現個體化用藥。

技術領域

本發明涉及醫學和生物技術領域，尤其涉及一種CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物、試劑盒及檢測方法。

背景技術

細胞色素P450(CYP)家族是藥物Ⅰ相代謝酶中一種重要的酶系，在生物體內的內源性物質和外源性物質的代謝中發揮重要作用。CYP2D6基因是CYP酶家族重要的成員之一，雖然只占肝臟酶總量的2～9％，卻參與20～30％藥物的代謝，包括抗抑郁藥、抗心律失常藥、抗精神病藥、鎮痛藥等。不同個體CYP2D6的活性最大可相差1000倍，在中國人群中最常見的多態性為CYP2D6*10，約51.6％的中國人攜帶此遺傳變異，該多態性導致CYP2D6的酶活性降低，且極不穩定，從而影響藥物代謝。

通過對患者的CYP2D6基因進行檢測，得到特定位點的基因型，以基因型的檢測結果來確定藥物的選擇，就可以實現個體化用藥，避免對免疫抑制劑不良反應。

目前常用的CYP2D6*10基因多態性檢測方法主要采用Taqman熒光探針法法。但Taqman熒光探針法靈敏度低、假陽性率高、耗時較長，通量小。因此，需要一種新的CYP2D6*10基因多態性檢測試劑盒及檢測方法，使得對CYP2D6*10基因多態性檢測的靈敏度高，假陽性率高，且檢測周期短。

發明內容

為了克服現有技術的上述不足，本發明提出一種CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物、試劑盒及檢測方法。為了達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

為實現上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明的第一個目的是提出一組CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物，包括CYP2D6*10野生型上游引物、CYP2D6*10突變型上游引物、CYP2D6*10野生型和CYP2D6*10突變型通用下游引物，所述CYP2D6*10野生型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，CYP2D6*10突變型上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，通用下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本發明的第二個目的是提出一種CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測試劑盒，所述試劑盒包括上述的一組CYP2D6*10基因的SYBR Green I檢測引物。

進一步地，所述試劑盒還包括從待檢測樣本中提取DNA的樣本處理試劑、PCR緩沖液、DNA聚合酶、陰性對照品、陽性對照品、顯色試劑。

更進一步地，所述陽性對照品包括CYP2D6*10野生型陽性對照和CYP2D6*10突變型陽性對照，所述CYP2D6*10野生型陽性對照和CYP2D6*10突變型陽性苷酸序列依次如SEQ IDNO：4～SEQ ID NO：5所示。

更進一步地，CYP2D6*10基因的突變型陽性對照包含CYP2D6*10基因突變型陽性模板序列，所述CYP2D6*10基因突變型陽性模板序列為由CYP2D6*10基因突變型上游引物與CYP2D6*10基因公共下游引物擴增出的PCR產物。