[發明專利]用于中華絨螯蟹繭蜂病毒PCR檢測的引物對及試劑盒

在審

• 申請號: 201911095969.0
• 申請日: 2019-11-11
• 公開（公告）號: CN110628958A
• 公開（公告）日: 2019-12-31
• 發明（設計）人: 貢成良;顧玉超;馮永杰;謝美萍;李鰻蕓;鮑勝華;周陽;薛仁宇;曹廣力;胡小龍;朱敏;張星
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 32257 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王玉仙

本發明公開了一種用于中華絨螯蟹繭蜂病毒PCR檢測的引物對及試劑盒。本發明提供了一種用于中華絨螯蟹繭蜂病毒PCR檢測的引物對，本發明的引物對根據如SEQ ID NO.3所示的中華絨螯蟹繭蜂病毒特異性序列進行設計，實現了中華絨螯蟹繭蜂病毒的PCR檢測。本發明實現了中華絨螯蟹繭蜂病毒的快速檢測，從模板制備至PCR產物的電泳檢測通常在5小時左右完成，由于PCR技術已非常普及，因此在一般的生物學實驗室均可實現，可廣泛應于養殖生產中中華絨螯蟹繭蜂病毒的檢測。與宏基因組、宏轉錄組檢測相比，速度快、費用低、針對性強，應用性好。

技術領域

本發明涉及一種用于中華絨螯蟹繭蜂病毒PCR檢測的引物對及試劑盒，屬于生物檢測技術領域。

背景技術

繭蜂病毒(Bracovirus)是多分體DNA病毒科>繭蜂病毒屬的成員，繭蜂病毒屬病毒粒子呈非完全圓柱狀，核衣殼圓柱狀，直徑約40nm，長度為30～150nm，病毒具囊膜，囊膜內可含有一個或多個核衣殼，病毒具有雙鏈環狀的多分散性DNA基因組。該病毒與繭蜂互利共生，其基因組可整合于繭蜂基因組內。繭蜂病毒主要存在于膜翅目繭蜂科寄生蜂中，對于寄生蜂成功寄生宿主起著至關重要的作用。

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)，別稱河蟹，是我國傳統的水產珍品。中華絨螯蟹養殖過程中往往發生各種各樣的疾病，但有關方面的研究非常缺乏。中華絨螯蟹細菌性疾病種類較多，主要有爛腮病、水腫病、弧菌病、腸炎病等。報道的病原菌主要為氣單胞菌、假單胞菌、擬態弧菌、副溶血弧菌等細菌病原，以氣單胞菌較為普遍，但病原與病癥的對應關系仍不明確。

中華絨螯蟹病毒性疾病的研究較少，目前從中華絨螯蟹中分離、鑒定或觀察到的病毒主要有呼腸孤病毒(Reovirus)、呼腸孤樣病毒(Reo-like virus)、小RNA病毒(Picornavirus)、皰疹病毒(herpes virus)、布尼亞病毒樣病毒(Bunya-like virus)、蟹瘟病毒(Cholera-like virus)。但這些病毒對河蟹的致病性、在養殖業的危害程度仍不太明了。河蟹顫抖病(環腿病、抖抖病)是研究報道較多的疾病，但從病原學的角度考慮，其病原仍不明確，主流報道的病原有病毒和螺原體(Spiroplasma)，其中報道較多的病毒是呼腸孤病毒，其中的EsRV905株已由國際病毒分類委員會正式定名為蟹十二片段呼腸孤病毒，為呼腸孤病毒科的一個新的屬-蟹十二片段呼腸孤病毒屬(Cardoreovirus)。對蝦的白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus)是引起對蝦養殖損失最大的病原，業已明確白斑綜合征病毒也能感染河蟹導致死亡。

中華絨螯蟹肝胰腺壞死征是近年來曾一度引起養殖業重大損失的疾病，曾有報道在具有肝胰腺壞死征河蟹的肝胰腺中檢測到微孢子蟲，一度認為微孢子蟲是肝胰腺壞死征的病原，但因用分離到的微孢子蟲回感不能復制出中華絨螯蟹肝胰腺壞死征，故否定了微孢子蟲是肝胰腺壞死征的病原的觀點。然而至今為止，華絨螯蟹肝胰腺壞死征的病因仍不明。

除上所述的中華絨螯蟹的疾病和病原外，也有報道一些真菌，例：蘭蟹鏈壺菌、海壺菌、水霉菌、綿霉等真菌寄生所引起的真菌病，以及纖毛蟲、擬變形蟲、吸蟲囊蚴、微基吸蟲、紐蟲、蟹奴蟲等寄生引起的寄生蟲病。