[發(fā)明專利]一種滇桐的組培快繁方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201911086276.5
• 申請日: 2019-11-08
• 公開（公告）號: CN110663552B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅桂芬;孫衛(wèi)邦;楊靜;楊佳俊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發(fā)明提供了一種滇桐的組培快繁方法，涉及植物組培技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述組培快繁方法將誘導(dǎo)與分化培養(yǎng)合二為一，增殖與繼代培養(yǎng)合二為一，壯苗與生根培養(yǎng)合二為一，培養(yǎng)方法簡化。本發(fā)明所述組培快繁方法可解決滇桐自然資源少，短時(shí)間內(nèi)達(dá)到大量繁殖、保存和持續(xù)利用的問題，填補(bǔ)滇桐在生物技術(shù)上的研究空白，為滇桐全面的開發(fā)和可持續(xù)利用奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種滇桐的組培快繁方法。

背景技術(shù)

滇桐Craigia yunnanensis隸屬于椴樹科滇桐屬，高6～20米落葉喬木，主要分布于南亞熱帶干濕交替炎熱氣候區(qū)及海拔500～1000米的山地林中，蒴果具薄紙質(zhì)翅，中國西南特有種。滇桐為寡種屬滇桐屬的重要樹種之一，在區(qū)系地理研究和選育珍貴樹種應(yīng)用中均有重要價(jià)值。2017年被列入《中國高等植物受威脅物種名錄》瀕危EN C2a；D種類；世界自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)也將其列為瀕危種類[EN]。目前嚴(yán)重威脅滇桐居群野外生存的因素主要有兩個(gè)：一是為了經(jīng)濟(jì)利益大量種植草果，嚴(yán)重侵占滇桐的棲息地；二是林區(qū)樹木的濫砍亂伐造成滇桐居群生態(tài)群落的破壞；導(dǎo)致滇桐的分布區(qū)域狹窄，生存受到嚴(yán)重威脅，是一種典型的極小種群物種。

目前，生物技術(shù)中的無菌快速繁殖已成為中藥材、花卉、瀕危物種、經(jīng)濟(jì)林果等種苗生產(chǎn)的重要手段。但是迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)沒有關(guān)于滇桐優(yōu)良單株組培快繁和相關(guān)的生物技術(shù)方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種滇桐的組培快繁方法，解決滇桐自然資源少以及短時(shí)間內(nèi)無法達(dá)到大量繁殖、保存和持續(xù)利用的問題。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種滇桐的組培快繁方法，包括以下步驟：(1)以消毒后的滇桐幼嫩組織作為外植體，將所述外植體接種于誘導(dǎo)分化共培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)分化共培養(yǎng)，得分化芽；所述誘導(dǎo)分化共培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括：1.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的IAA、30g/L的蔗糖和5g/L的瓊脂；

(2)將所述分化芽接種于增殖繼代共培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖繼代共培養(yǎng)，得幼苗；所述增殖繼代共培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括：0.8mg/L的6-BA、0.5mg/L的IAA、30g/L的蔗糖和5g/L的瓊脂；

(3)將所述幼苗接種于壯苗生根共培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗生根共培養(yǎng)，得滇桐組培苗；所述壯苗生根共培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，還包括：0.8mg/L的IAA、0.8mg/L的IBA、30g/L的蔗糖和5g/L的瓊脂。

優(yōu)選的，步驟(1)所述滇桐幼嫩組織包括滇桐頂芽或側(cè)芽；所述消毒的方法，包括：用質(zhì)量體積比為1％的肥皂水浸泡10min，經(jīng)流水沖洗干凈后，用體積百分含量為75％的酒精溶液消毒10s，無菌水沖洗3遍后，再用體積百分含量為0.1％的升汞溶液消毒5min，無菌水清洗3～5次。

優(yōu)選的，步驟(1)所述誘導(dǎo)分化共培養(yǎng)、步驟(2)所述增殖繼代共培養(yǎng)和步驟(3)所述壯苗生根共培養(yǎng)的光照強(qiáng)度均為1500Lux，溫度均為23～30℃。

優(yōu)選的，步驟(1)所述誘導(dǎo)分化共培養(yǎng)的培養(yǎng)周期為30d；步驟(2)所述增殖繼代共培養(yǎng)的培養(yǎng)周期為60d；步驟(3)所述壯苗生根共培養(yǎng)的培養(yǎng)周期為30d。

優(yōu)選的，在步驟(3)得所述滇桐組培苗后，還包括煉苗和移栽。

優(yōu)選的，所述煉苗時(shí)的遮光率為75～85％。

優(yōu)選的，所述移栽的基質(zhì)包括以下組分：珍珠巖、腐殖土和生紅土，所述珍珠巖、腐殖土和生紅土的體積比為1：2：3。

優(yōu)選的，在所述移栽后的栽培溫度為20～30℃，遮光度為75～85％，空氣濕度為50～60％，基質(zhì)濕度為75～85％。